k******0 发帖数: 1073 | 1 近来研究一个g-actin的结合蛋白,但不知有啥功能。哪位能够接受一下g-actin
pool的生理作用吗,即在正常生理情况下,什么因素会促进F-actin解体形成g-actin
?g-actin的含量提高,会影响到细胞蛋白质代谢吗?
谢谢大牛们解答。 |
l**********1 发帖数: 5204 | 2 LZ
title 要改成
'召唤sunnyday 师姐/兄 G-actin和F-actin的转化受什么因素控制的?'
就会马上有答案啦 |
x*****e 发帖数: 309 | 3 Make my day, lol
【在 l**********1 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : LZ : title 要改成 : '召唤sunnyday 师姐/兄 G-actin和F-actin的转化受什么因素控制的?' : 就会马上有答案啦
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s******y 发帖数: 28562 | 4 你是问体外还是体内情况?
一般而言有这几种情况:
1。离子:Mg2+, ATP, K+ 促进G-actin -> F-actin,
Ca2+, ADP, Na+ 促进F-actin-> G-actin
2. 附属蛋白(按正常情况下的重要性排序):
(1)切断F-actin 的蛋白: such as gelsolin
(2) 阻断F-actin plus end 的蛋白, such as capping protein
(3) 隔离G-actin,导致有效浓度降低的蛋白,such as thymosin beta-4
你做的那个蛋白有可能类似第(3)种。
G-actin 含量的提高会影响到很多蛋白的代谢,一个最常见的例子就是
serum-response-factor (SRF),这个蛋白本身是一个transcrption factor,
它能直接感知G-actin的含量(有结合力),调控一些非常重要的基因。
actin
【在 k******0 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 近来研究一个g-actin的结合蛋白,但不知有啥功能。哪位能够接受一下g-actin : pool的生理作用吗,即在正常生理情况下,什么因素会促进F-actin解体形成g-actin : ?g-actin的含量提高,会影响到细胞蛋白质代谢吗? : 谢谢大牛们解答。
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s*****e 发帖数: 1 | 5 怎么能看到细胞内G-actin and F-actin含量的变化? |
s******y 发帖数: 28562 | 6 很多种方法,比方说有很多试剂是专门染色F-actin 的。
还有一个常用方法就是把细胞裂解了进行高速离心,
F-actin 会沉淀下来。
【在 s*****e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 怎么能看到细胞内G-actin and F-actin含量的变化?
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k******0 发帖数: 1073 | 7 Sunnyday太赞了,非常谢谢。
如何得到稳定的g-actin?我用LatB获得单体,但好像单体actin不稳定,几天过后就
开始沉淀。可以液氮冻起来吗?
你有没有表达过non-polymerisable mutant actin?用于reconstitute protein
complex。
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 你是问体外还是体内情况? : 一般而言有这几种情况: : 1。离子:Mg2+, ATP, K+ 促进G-actin -> F-actin, : Ca2+, ADP, Na+ 促进F-actin-> G-actin : 2. 附属蛋白(按正常情况下的重要性排序): : (1)切断F-actin 的蛋白: such as gelsolin : (2) 阻断F-actin plus end 的蛋白, such as capping protein : (3) 隔离G-actin,导致有效浓度降低的蛋白,such as thymosin beta-4 : 你做的那个蛋白有可能类似第(3)种。 : G-actin 含量的提高会影响到很多蛋白的代谢,一个最常见的例子就是
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s******y 发帖数: 28562 | 8 G-actin 需要保存在G- buffer( Ca+, EDTA, ATP, Na+, DTT)里(你可以去查
google 看配方,否则很容易变性。
加上适量grycerol 之后可以保存在液氮里。
non-polymerisable mutant actin我做过几个版本,一般都很容易变性,
所以保存在液氮里是对的。
【在 k******0 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : Sunnyday太赞了,非常谢谢。 : 如何得到稳定的g-actin?我用LatB获得单体,但好像单体actin不稳定,几天过后就 : 开始沉淀。可以液氮冻起来吗? : 你有没有表达过non-polymerisable mutant actin?用于reconstitute protein : complex。
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k******0 发帖数: 1073 | 9 非常谢谢指点。
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : G-actin 需要保存在G- buffer( Ca+, EDTA, ATP, Na+, DTT)里(你可以去查 : google 看配方,否则很容易变性。 : 加上适量grycerol 之后可以保存在液氮里。 : non-polymerisable mutant actin我做过几个版本,一般都很容易变性, : 所以保存在液氮里是对的。
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k******0 发帖数: 1073 | 10 非常谢谢指点。
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : G-actin 需要保存在G- buffer( Ca+, EDTA, ATP, Na+, DTT)里(你可以去查 : google 看配方,否则很容易变性。 : 加上适量grycerol 之后可以保存在液氮里。 : non-polymerisable mutant actin我做过几个版本,一般都很容易变性, : 所以保存在液氮里是对的。
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k******0 发帖数: 1073 | 11 Sunnyday, 谢谢你的指点。
你是否还有mutant actin的质粒,能否向你要些?
这些mutant actin在E coli中表达如何?
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : G-actin 需要保存在G- buffer( Ca+, EDTA, ATP, Na+, DTT)里(你可以去查 : google 看配方,否则很容易变性。 : 加上适量grycerol 之后可以保存在液氮里。 : non-polymerisable mutant actin我做过几个版本,一般都很容易变性, : 所以保存在液氮里是对的。
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s******y 发帖数: 28562 | 12 很抱歉我是在研究生院的时候做那些事情的了。后来搬了好几次家之后,
不知道怎么的很多质粒都找不到了。
另外,Actin 在E.coli 中表达后一般都是没有活性的(因为actin折叠需要
一些特殊的chaperon)。
等我有空的时候可能会试试一些新方法,如果能做出来会让你知道的。
【在 k******0 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : Sunnyday, 谢谢你的指点。 : 你是否还有mutant actin的质粒,能否向你要些? : 这些mutant actin在E coli中表达如何?
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