L*****t
发帖数: 56 | 1 有一个醛缩酶在体内的反应如下
X ----> Y + Z
具体反应机制暂时不明，但应该是ping-pong mechanism
文献中测活的方式体系是再加一种酶把Z转换成可以显色的产物，但是我发现实际上Y甚
至X也参与第二步反应，也就是说这是个Dirty System，尝试过用数学方法分析但是数
据本身的可重复性也很差，可能是因为底物X的纯度不够，总之是一团糟。
还有一种测活方法就是利用逆反应：
Z + Y ----> X
X也可以转化成可显色的产物，试验的结果很不错，重复了几次都差不多。但是得出的
数据和另一个反应方向依然无法统一。问题是我要怎么说服老板相信只有这个方向上的
数据是可信的？一个可逆反应，两个方向上的Kcat是一样的吗？ |
x**2
发帖数: 255 | 2 ping-pong mechanism不是要有两个底物的么？ |
a*****x
发帖数: 901 | 3 不是很清楚你的设计，正向kcat时，饱和底物是X？逆向kcat饱和底物是？
可逆反应的kcat两个方向当然不同，因为Gibbs free energy不同 |
L*****t
发帖数: 56 | 4 两个方向上饱和底物都是Y，而且Y过量的话感觉有Substrate Inhibition
kcat的问题我想清楚了，谢谢！
【在 a*****x 的大作中提到】
: 不是很清楚你的设计，正向kcat时，饱和底物是X？逆向kcat饱和底物是？
: 可逆反应的kcat两个方向当然不同，因为Gibbs free energy不同
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p*****u
发帖数: 191 | 5 关于 Y的浓度 你一般的酶动力学都是考虑到他的初始速度，摸索一个合适的浓度，合
适的时间段内做动力学应该没问题。
至于你说的 文献中测活的方式体系是再加一种酶把Z转换成可以显色的产物
这个反应应该非常快，这一步应该一般不考虑。但是你说 你发现 Y X 也参与，那你老
板还敢用吗？而且那个文献的测活方法也不适合你这个系统吧。
其实X的浓度挺关键的，它的数值应该直接关系到你数学分析中用到的数据。 |
