F*****e
发帖数: 182 | 1 E14.5小鼠胚胎石蜡切片，取胸腔进行固定和包埋，目的是检查心脏形态和结构。但是
石蜡切片总是发皱，见附图。
固定采用4%多聚甲醛过夜。
脱水过程：
PBS洗两次
70% 乙醇 40min
95% 乙醇 40min
100% 乙醇 40min
100% 乙醇 40min
二甲苯 20min
二甲苯 20min
二甲苯：石蜡 （1：1） 40min
石蜡 1hr
石蜡 1hr
浸蜡温度在55-56度，包埋后4度保存，切片厚度为8um。切片的过程中感觉石蜡发软，
片子压缩发皱。请有经验的朋友看看是什么原因？怎样解决？多谢！ |
l******u
发帖数: 936 | 2 放在冰或者专门石蜡切片的冷却器上放一会儿边冻边切。 |
D*a
发帖数: 6830 | 3 paraffin切片不就是皱的么，载玻片滴水，放在37度台上，挑切片放到水的表面，泡一
会就开了，把载玻片倾斜，把水倒了 |
w*********n
发帖数: 439 | 4 Before doing section, put your paraffin block in -20 for 30min.
When you do sectioning, using wet tissue paper to wet the cutting surface of
your block.
Using warm water to float your tissue section.
Every thing should be fine. |
F*****e
发帖数: 182 | 5 多谢大家的回复。
我是用50度左右的温水展片的，这些褶皱也展不开。我试了下以前相同条件包埋的样品
，可以展的比较平整。是不是蜡太软了？准备换种牌子的蜡试试。或者脱水或浸蜡时间
不够？
另外准备先把样品冻一下，再切切看。 |
D*a
发帖数: 6830 | 6 拿两根针在两头拽一拽也开不了么
【在 F*****e 的大作中提到】
: 多谢大家的回复。
: 我是用50度左右的温水展片的，这些褶皱也展不开。我试了下以前相同条件包埋的样品
: ，可以展的比较平整。是不是蜡太软了？准备换种牌子的蜡试试。或者脱水或浸蜡时间
: 不够？
: 另外准备先把样品冻一下，再切切看。
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F*****e
发帖数: 182 | 7 不行啊。
【在 D*a 的大作中提到】
: 拿两根针在两头拽一拽也开不了么
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d**********g
发帖数: 129 | 8 用蘸着氯仿的棉签在切好的切片上来回挥几下，注意不要让氯仿滴到切片上。不知道对
这个厚度氯仿还有没有用。
【在 F*****e 的大作中提到】
: E14.5小鼠胚胎石蜡切片，取胸腔进行固定和包埋，目的是检查心脏形态和结构。但是
: 石蜡切片总是发皱，见附图。
: 固定采用4%多聚甲醛过夜。
: 脱水过程：
: PBS洗两次
: 70% 乙醇 40min
: 95% 乙醇 40min
: 100% 乙醇 40min
: 100% 乙醇 40min
: 二甲苯 20min
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D*a
发帖数: 6830 | 9 求原理？
【在 d**********g 的大作中提到】
: 用蘸着氯仿的棉签在切好的切片上来回挥几下，注意不要让氯仿滴到切片上。不知道对
: 这个厚度氯仿还有没有用。
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w***a
发帖数: 1053 | |
g*****n
发帖数: 250 | 11 还是老将出马吧。
用刷子往刀刃上抹点蜡，从下往上抹，别伤了刀刃。
切的时候把蜡带抬起来，减少在刀上的磨擦。
40度水上展开。 |
l********e
发帖数: 415 | 12 不是切片的问题 是处理的问题
100% ethanol做3次 每次久一点 rolling
Xylene做三次15min rolling
最重要 100% wax in vacuum owen overnight
【在 F*****e 的大作中提到】
: E14.5小鼠胚胎石蜡切片，取胸腔进行固定和包埋，目的是检查心脏形态和结构。但是
: 石蜡切片总是发皱，见附图。
: 固定采用4%多聚甲醛过夜。
: 脱水过程：
: PBS洗两次
: 70% 乙醇 40min
: 95% 乙醇 40min
: 100% 乙醇 40min
: 100% 乙醇 40min
: 二甲苯 20min
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l**********1
发帖数: 5204 | 13 Mark.
【在 l********e 的大作中提到】
: 不是切片的问题 是处理的问题
: 100% ethanol做3次 每次久一点 rolling
: Xylene做三次15min rolling
: 最重要 100% wax in vacuum owen overnight
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