s******a 发帖数: 472 | 1 我用PCR阳性率有25%,估计最后southern大多是假阳性吧。
PS:我的上游引物在homologous arm外,下游引物在insert。
大家最后southern阳性率多少呢?我看有筛500个才1个的。像我就挑了200多是
不是很可能1个都没有呢。 |
y***j 发帖数: 11235 | |
s******a 发帖数: 472 | 3 看来只能烧高香了
【在 y***j 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 有可能。
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H****N 发帖数: 997 | 4 Depending on the gene, it can be as high as 50%, or as low as <1%. |
d****d 发帖数: 214 | 5 我上一次knockin 做PCR筛选,居然用错了引物(本来应该用external pair的,实际用
了internal pair),到第二轮筛选的时候才意识到第一轮筛选的错误。当时以为这下完
了,要被老板骂死了。幸运的是就这样筛选出来的“假阳性”居然到后来发现都是“真
阳性”,可见这次targeting的整合率要接近100%。我想整合率高低很大程度上取决于
targeting construct的好坏吧。
【在 s******a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我用PCR阳性率有25%,估计最后southern大多是假阳性吧。 : PS:我的上游引物在homologous arm外,下游引物在insert。 : 大家最后southern阳性率多少呢?我看有筛500个才1个的。像我就挑了200多是 : 不是很可能1个都没有呢。
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s******a 发帖数: 472 | 6 运气真好
【在 d****d 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我上一次knockin 做PCR筛选,居然用错了引物(本来应该用external pair的,实际用 : 了internal pair),到第二轮筛选的时候才意识到第一轮筛选的错误。当时以为这下完 : 了,要被老板骂死了。幸运的是就这样筛选出来的“假阳性”居然到后来发现都是“真 : 阳性”,可见这次targeting的整合率要接近100%。我想整合率高低很大程度上取决于 : targeting construct的好坏吧。
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