z*t
发帖数: 863 | 1 再做一个200kd蛋白的western blot，在高表达此蛋白的细胞系中试了一个抗体后发现
在膜上的带在250kd左右，还有若干小于130kd的带，这种情况可能是antibody的非特异
反应么或者是蛋白有isoform和post-translational modification？我怎么能确认
250kd的带是我的蛋白呢？
谢谢各路神仙啦 |
r***e
发帖数: 2539 | 2 RNAi knockdown and check the bands.
【在 z*t 的大作中提到】
: 再做一个200kd蛋白的western blot，在高表达此蛋白的细胞系中试了一个抗体后发现
: 在膜上的带在250kd左右，还有若干小于130kd的带，这种情况可能是antibody的非特异
: 反应么或者是蛋白有isoform和post-translational modification？我怎么能确认
: 250kd的带是我的蛋白呢？
: 谢谢各路神仙啦
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q******g
发帖数: 3858 | |
H*g
发帖数: 2333 | 4 Where did u get the antibody?
【在 z*t 的大作中提到】
: 再做一个200kd蛋白的western blot，在高表达此蛋白的细胞系中试了一个抗体后发现
: 在膜上的带在250kd左右，还有若干小于130kd的带，这种情况可能是antibody的非特异
: 反应么或者是蛋白有isoform和post-translational modification？我怎么能确认
: 250kd的带是我的蛋白呢？
: 谢谢各路神仙啦
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w********r
发帖数: 1431 | 5 1. siRNA or KO cell
2. Overexpress tagged protein (HA or Flag), blot with tag-antibody and your
ab side by side. |
z*t
发帖数: 863 | 6 A new campany called my biosoure
【在 H*g 的大作中提到】
: Where did u get the antibody?
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z*t
发帖数: 863 | 7 Thanks so much all you comments:)
I just communicate with people in the field, I found actually the protein
can be posttranslational modified:) I will try the method your guys provide
and test the antibody again:)
your
【在 w********r 的大作中提到】
: 1. siRNA or KO cell
: 2. Overexpress tagged protein (HA or Flag), blot with tag-antibody and your
: ab side by side.
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