s*********y
发帖数: 579 | 1 我们最近引进了两种Cre小鼠，一种是持续表达的，一种是诱导的(ERT2-Cre)。请问
ERT2怎么genotyping?怎么设计primer？我找了plasmid,是pCAG-ERT2CreERT2，没有找
到ERT2 site。 |
m******5
发帖数: 1383 | 2 addgene找两个带ert2的plasmid 找addgene测的序列
【在 s*********y 的大作中提到】
: 我们最近引进了两种Cre小鼠，一种是持续表达的，一种是诱导的(ERT2-Cre)。请问
: ERT2怎么genotyping?怎么设计primer？我找了plasmid,是pCAG-ERT2CreERT2，没有找
: 到ERT2 site。
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i*********0
发帖数: 915 | 3 就genotype cre就可以了。大部分的cre的primer序列都是一样的。Jax lab的网站上有
。 |
s*********y
发帖数: 579 | 4 我把两个feamale（一个是Cre,一个是Cre-ERT2）在一个cage 里harem breeding。结果
两个的Ear tag 都丢了，我现在需要知道哪个是ERT2 的。所以想用tail genotype.
这个上面http://www.addgene.org/14797/
只给出了cre site，没有说哪个是ERT2. |
i*********0
发帖数: 915 | 5 bro, 你的sunday算是毁掉了。不同的line，你居然可以在一个cage里面。一王二后也
不是这么玩的。
cre的female和cre-ERT2的female的offspring你还是要做genotyping。
Cre-ERT2的parental plasmid可能都是一样的，你去google 一下做个引物看看吧。
要是老鼠怀孕，没有生产的话，赶快分开！
【在 s*********y 的大作中提到】
: 我把两个feamale（一个是Cre,一个是Cre-ERT2）在一个cage 里harem breeding。结果
: 两个的Ear tag 都丢了，我现在需要知道哪个是ERT2 的。所以想用tail genotype.
: 这个上面http://www.addgene.org/14797/
: 只给出了cre site，没有说哪个是ERT2.
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S******9
发帖数: 2837 | 6 non-inducible 和 inducible的Cre检测的方法没啥差别，对于systemic和VE-Cadherin
都是一样的检测方法。
但是如果是Lyscre，PDGFb Cre，CIVE Cre， Tie2-CRe都是不一样的。 |
s*********y
发帖数: 579 | 7 I alreeady seperated them. But don't which is which now. |
l**********1
发帖数: 5204 | 8 qPCR mouse tail tissue extraction DNA
pls refer,
>The SM22aCre-ERT2 mice (Kuhbandner et al. 2000) were generously provided by
Robert
Feil (Interfakulta¨res Institut fu¨rBiochemie,Universita¨tTu¨bingen,
Germany). SM22a protein binds actin and contributes to
smooth muscle contractility ( Je and Sohn 2007; Assinder
et al. 2009) and is expressed specifically in adult smooth
muscle cells of the vasculature and viscera. Genotyping
primers used are listed in supporting information,Table S1.
Genotyping and qPCR Primers
Flox primers
fl 5' fwd GTGAAGTAGGTGAAAGGTAAC
fl 5' rev TTCTAGAGGGAAGGGCAA
fl 3' fwd ACCATCAATTGTCACTATCAGTGCT
fl 3' rev (lacZ) AAACCAGGCAAAGCGCCATT
E3 primers
e3 5' fwd CGCAGAACAATAGGTGCTGAAATTAC
e3 5' rev CGTACACTGAGAACCACAAACGGC
e3 3' rev CCACAACTTTCCCAGTTAGCTCTC
null primers
null fwd TCACCTCCTAACCCTGAGAT
null rev GCAATCCATCTTGTTCAATG
null wt rev CAATCCAGGAAACCAGTTGC
qPCR Primers
Total Genomic fwd GAGAGCCCCAGGAGACTGTGT
Total Genomic rev CAAAGTTAGTATTCCTACAGCAGAAAGC
Flanked DNA fwd GATTGCCGTTTGTGGTTCTCA
Flanked DNA rev GCTATACCAGGCTACTCCAAAGAAA
Unrecombined e3 fwd GTCAACAGTATGGTCTAATGGTGTGTAG
Unrecombined e3 rev ACAAACGGCAATCATCTTGTCTT
Unrecombined flox fwd TGTGAAGTAGGTGAAAGAAGGTAACG
Unrecombined flox rev CGAGGAATTCCGATCATATTCAA
Unrecombined flox probe CCGATAAGCTTGGCTGGACGTAAACTCC
from one paper PDF link:
HTTP: //www.genetics.org/content/186/3/959.full.pdf
【在 s*********y 的大作中提到】
: I alreeady seperated them. But don't which is which now.
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D*a
发帖数: 6830 | 9 问作者要，如果作者没有，就查这个老鼠的文献的引用文献的引用文献的引用文献，总
能找到plasmid的构造的，然后分别设计引物就行了。
其实既然你们有两只老鼠，最好是用能区别开两只老鼠的genotype的引物，否则你不知
道一阵子之后是不是还有这种问题。有时候老鼠房给你们弄混了也不是不可能。所以也
不算浪费时间。 |
