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Biology版 - 请推荐个大抽的protocol
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大的plasmid是不是不好转染?Attractene转染plasmid出现白色沉淀
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话题: protocol话题: plant话题: dna话题: 转染
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b******s
发帖数: 1089
1
Kit好用,但是很贵。一个盒子里没几个柱子。
我要做BIFC,有很多组合,需要提很多plasmids。想自己提纯。网上搜了一些protocol
,基本上都是盐沉淀之后酚氯仿纯化。试过发现转染效率都极低。我用的系统是植物的
protoplasts,有实验室用CsCL离心效果很好。想问问有没有更清洁安全的protocol?
谢谢
h******y
发帖数: 351
2
I have used the protocol in this paper. It worked really well.
http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.00
A Rapid and Economic In-House DNA Purification Method Using Glass Syringe Fi
lters

protocol

【在 b******s 的大作中提到】
: Kit好用,但是很贵。一个盒子里没几个柱子。
: 我要做BIFC,有很多组合,需要提很多plasmids。想自己提纯。网上搜了一些protocol
: ,基本上都是盐沉淀之后酚氯仿纯化。试过发现转染效率都极低。我用的系统是植物的
: protoplasts,有实验室用CsCL离心效果很好。想问问有没有更清洁安全的protocol?
: 谢谢

J****n
发帖数: 156
3
Try this.
Protocol: a rapid and economical procedure for purification of plasmid or
plant DNA with diverse applications in plant biology
Plant Methods 2010, 6:1 doi:10.1186/1746-4811-6-1

protocol

【在 b******s 的大作中提到】
: Kit好用,但是很贵。一个盒子里没几个柱子。
: 我要做BIFC,有很多组合,需要提很多plasmids。想自己提纯。网上搜了一些protocol
: ,基本上都是盐沉淀之后酚氯仿纯化。试过发现转染效率都极低。我用的系统是植物的
: protoplasts,有实验室用CsCL离心效果很好。想问问有没有更清洁安全的protocol?
: 谢谢

b***2
发帖数: 348
4
我用过清华谢振华的 用于哺乳动物细胞转染的高纯度 质粒 DNA 的制备 的方案,拿到
一大堆用于转染的质粒,花的时间长点,但便宜。

:Try this.

:Protocol: a rapid and economical procedure for purification of plasmid or
:plant DNA with diverse applications in plant biology
:Plant Methods 2010, 6:1 doi:10.1186/1746-4811-6-1

:【 在 boulders (walnut) 的大作中提到: 】
……

【在 J****n 的大作中提到】
: Try this.
: Protocol: a rapid and economical procedure for purification of plasmid or
: plant DNA with diverse applications in plant biology
: Plant Methods 2010, 6:1 doi:10.1186/1746-4811-6-1
:
: protocol

b******s
发帖数: 1089
5
非常感谢。我在公司主页看不到价格,能否告知Glass Syringe filters的价格?

Fi

【在 h******y 的大作中提到】
: I have used the protocol in this paper. It worked really well.
: http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.00
: A Rapid and Economic In-House DNA Purification Method Using Glass Syringe Fi
: lters
:
: protocol

b******s
发帖数: 1089
6
我以前也看到过。他们只用2ml的mini-prep,最后几个ul elute,然后做protoplasts
的转染,文章里说有70%的转染率。不知道你有没有试过?转染效率是否有这么高?我
要做BIFC,需要相对高的转染效率。谢谢

【在 J****n 的大作中提到】
: Try this.
: Protocol: a rapid and economical procedure for purification of plasmid or
: plant DNA with diverse applications in plant biology
: Plant Methods 2010, 6:1 doi:10.1186/1746-4811-6-1
:
: protocol

h******y
发帖数: 351
7
I bought it from VWR.
https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=28143-986
Case of 200 $284.91
Each filter has a binding capacity of about 100-150ug plasmid. You can use
several filters as shown in Figure 1 in the paper for maxiprep.

【在 b******s 的大作中提到】
: 非常感谢。我在公司主页看不到价格,能否告知Glass Syringe filters的价格?
:
: Fi

c********b
发帖数: 363
8
其实我就用的Midi,抽一次可以用15个样。
而且,柱子还可以放在4度反复用(对同一个construct
midi一个kit要多好多柱子,而且我都是用的100ml的菌液

protocol

【在 b******s 的大作中提到】
: Kit好用,但是很贵。一个盒子里没几个柱子。
: 我要做BIFC,有很多组合,需要提很多plasmids。想自己提纯。网上搜了一些protocol
: ,基本上都是盐沉淀之后酚氯仿纯化。试过发现转染效率都极低。我用的系统是植物的
: protoplasts,有实验室用CsCL离心效果很好。想问问有没有更清洁安全的protocol?
: 谢谢

J****n
发帖数: 156
9
我scale up他们的protocol for 100 ml菌液。work得很好,也很容易。

protoplasts

【在 b******s 的大作中提到】
: 我以前也看到过。他们只用2ml的mini-prep,最后几个ul elute,然后做protoplasts
: 的转染,文章里说有70%的转染率。不知道你有没有试过?转染效率是否有这么高?我
: 要做BIFC,需要相对高的转染效率。谢谢

L*****e
发帖数: 135
10
销量只是一般
b******s
发帖数: 1089
11
非常感谢各位的建议。
b******s
发帖数: 1089
12
请问这是回哪一贴?

【在 L*****e 的大作中提到】
: 销量只是一般
1 (共1页)
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请推荐一下关于分子生物学技术的书籍,多谢攒人品!分享PLASMID大提经验
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话题: protocol话题: plant话题: dna话题: 转染