m*****j
发帖数: 144 | 1 最近constructed了一个reporter strain tagged with GFP for screening drug, 可
试了实验室能用的所有media（LB10,YP, 3M+glucose），发现每种培养基都有很强
fluorescent background(就是说，在不加入reporter bacterium的情况下，信号度数
就很大了)。我想请教下大家，我还能尝试哪些media呢，有啥建议没？单纯的PBS确实
没有背景干扰，但是细菌没法在这里面长啊，我要不要试试PBS+glucose？
如果这个screening方法不能用（我们用96孔板筛选），我们就得一个个的fraction单
独做实验了，那工作量就是指数上升了
先谢谢大家了 | s******y
发帖数: 28562 | 2 在我的理解中，你用的细菌培养基的自发荧光应该主要来源于里面的水解蛋白。另外，
agar 也有一定程度的荧光。
如果可以的话，你可以试验看看能不能用： 氨基酸混合物 + Glucose + agarose +
NaCl
【在 m*****j 的大作中提到】
: 最近constructed了一个reporter strain tagged with GFP for screening drug, 可
: 试了实验室能用的所有media（LB10,YP, 3M+glucose），发现每种培养基都有很强
: fluorescent background(就是说，在不加入reporter bacterium的情况下，信号度数
: 就很大了)。我想请教下大家，我还能尝试哪些media呢，有啥建议没？单纯的PBS确实
: 没有背景干扰，但是细菌没法在这里面长啊，我要不要试试PBS+glucose？
: 如果这个screening方法不能用（我们用96孔板筛选），我们就得一个个的fraction单
: 独做实验了，那工作量就是指数上升了
: 先谢谢大家了
| H*******i
发帖数: 196 | 3 E coli得话
M9 minimal media 0.4%碳源我一般用甘油，不过这个应该区别不大
想让细菌长好点，可以加0.2%casamino acid（选个颜色淡点的，当然你也可以20种氨
基酸一个个加过去，不怕麻烦的话。。），thi缺陷的菌种要加thiamine，另外微量元
素就自己看着加了。
http://openwetware.org/wiki/M9_medium/minimal
我用的加casamino acid的GFP background读数大概是LB的1/10
不怕麻烦/不怕贵可以自己配/买这个
http://www.teknova.com/EZ-RICH-DEFINED-MEDIUM-KIT-p/m2105.htm |
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