d****i
发帖数: 2346 | 1 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！ |
d*****b
发帖数: 19 | 2 http://www.springer.com/new+%26+forthcoming+titles+%28default%2
这本书里有很多乙酰化的测试方法，你可以找一找。
【在 d****i 的大作中提到】
: 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
: CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
: 大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
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J********3
发帖数: 3151 | 3 非组蛋白乙酰化一般不大好检测， 最好先IP下来，再做WB。
【在 d****i 的大作中提到】
: 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
: CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
: 大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
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d****i
发帖数: 2346 | |
A******y
发帖数: 2041 | 5 That's because the ac-p52 antibody is horrible. Same thing for Ac-Hsp90 etc
. It is the best to I.P. the protein and do acetyl-lysine antibody...the
problem is that acetyl-lysine ab is horrible, too.
【在 d****i 的大作中提到】
: 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
: CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
: 大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
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d****i
发帖数: 2346 | 6
etc
谢谢！是提取nuclear protein做乙酰化western好 还是 从total cell lysate 里IP
以后做乙酰化好？我需要比较各个时间点乙酰化程度的不同。。。。
【在 A******y 的大作中提到】
: That's because the ac-p52 antibody is horrible. Same thing for Ac-Hsp90 etc
: . It is the best to I.P. the protein and do acetyl-lysine antibody...the
: problem is that acetyl-lysine ab is horrible, too.
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K******S
发帖数: 10109 | 7 do mass spec if you don't have good antibodies.
【在 d****i 的大作中提到】
: 最近在做p65的核内乙酰化，total的p65做得很好，但是乙酰化检测不到。抗体用的是
: CST的。看到有的公司的western图片注解上说竟然用了180ug蛋白。。。。。。顺便请
: 大家推荐乙酰化p65抗体。谢谢！
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A******y
发帖数: 2041 | 8 Total lysate. If you want to do mass spec., find a good lab to teach you.
Too many horrible mass spec core facility or labs these days.
IP
【在 d****i 的大作中提到】
:
: etc
: 谢谢！是提取nuclear protein做乙酰化western好 还是 从total cell lysate 里IP
: 以后做乙酰化好？我需要比较各个时间点乙酰化程度的不同。。。。
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d****i
发帖数: 2346 | 9
非常感谢！ac-p65我试了abcam的抗体，能看见信号，就是很弱很弱。有个问题就是，
如果用total lysate就没法证明乙酰化的蛋白是核内起作用的。有人说乙酰化也可能发
生在胞浆。
【在 A******y 的大作中提到】
: Total lysate. If you want to do mass spec., find a good lab to teach you.
: Too many horrible mass spec core facility or labs these days.
:
: IP
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d****i
发帖数: 2346 | |
d****i
发帖数: 2346 | 11
用nuclear lysate会不会更好？乙酰化应该是发生在核内。
【在 A******y 的大作中提到】
: Total lysate. If you want to do mass spec., find a good lab to teach you.
: Too many horrible mass spec core facility or labs these days.
:
: IP
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