D*a
发帖数: 6830 | 1 比如切50微米，或者更厚一点的切片，然后放到片子上做confocal，求能保存组织厚度
做Z轴的产品，或者大家都是怎么封的，求推荐。50微米只是暂定的，如果能再厚一点
更好。 |
s*****j
发帖数: 6435 | 2 加 spacer
【在 D*a 的大作中提到】
: 比如切50微米，或者更厚一点的切片，然后放到片子上做confocal，求能保存组织厚度
: 做Z轴的产品，或者大家都是怎么封的，求推荐。50微米只是暂定的，如果能再厚一点
: 更好。
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D*a
发帖数: 6830 | 3 没用过，求推荐几个啊~
【在 s*****j 的大作中提到】
: 加 spacer
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s******y
发帖数: 28562 | 4 最简单的办法，就是用parafilm剪一个洞，然后贴在玻璃片上，然后小心的把样品放在
中间的空洞里，然后加mounting medium, 然后封装。
如果你要更fancy 的话，貌似某些公司有一定厚度的spacer 卖。但是我实在想不起是
哪个公司了。
【在 D*a 的大作中提到】
: 没用过，求推荐几个啊~
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c*********r
发帖数: 1312 | 5 我的一点个人经验，没在于切片上用过，也许适用。
1. 两边或者四边贴胶带
2. 盖玻片四角粘一丁点儿modeling clay，用镊子轻轻挤压可以调节高度
3. 注射器里装vaseline后装200 ul枪头，在载玻片上划一圈，但是要留个孔来排空气
，然后加样本和盖玻片。这个方法不熟练的话会弄得vaseline到处都是。不推荐。不过
我经常用
4. 也许可以用PAP pen多涂几层。我觉得这个方法如果可行的话应该是最方便的了。
【在 D*a 的大作中提到】
: 比如切50微米，或者更厚一点的切片，然后放到片子上做confocal，求能保存组织厚度
: 做Z轴的产品，或者大家都是怎么封的，求推荐。50微米只是暂定的，如果能再厚一点
: 更好。
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c*********r
发帖数: 1312 | 6 2. 用熟了也很方便。
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我的一点个人经验，没在于切片上用过，也许适用。
: 1. 两边或者四边贴胶带
: 2. 盖玻片四角粘一丁点儿modeling clay，用镊子轻轻挤压可以调节高度
: 3. 注射器里装vaseline后装200 ul枪头，在载玻片上划一圈，但是要留个孔来排空气
: ，然后加样本和盖玻片。这个方法不熟练的话会弄得vaseline到处都是。不推荐。不过
: 我经常用
: 4. 也许可以用PAP pen多涂几层。我觉得这个方法如果可行的话应该是最方便的了。
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D*a
发帖数: 6830 | 7 parafilm 能被mounting medium粘住吗，四周还是照样指甲油封？会不会干掉了？
【在 s******y 的大作中提到】
: 最简单的办法，就是用parafilm剪一个洞，然后贴在玻璃片上，然后小心的把样品放在
: 中间的空洞里，然后加mounting medium, 然后封装。
: 如果你要更fancy 的话，貌似某些公司有一定厚度的spacer 卖。但是我实在想不起是
: 哪个公司了。
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D*a
发帖数: 6830 | 8 好经验！
贴胶带是那种纸的tap还塑料的？modeling clay是橡皮泥？vaseline是那个护手霜还是
实验室的产品？
同样的问题就是mounting medium是不是要多加，会不会干掉？
PAP pen感觉堆不起来，估计前三种选一种吧
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我的一点个人经验，没在于切片上用过，也许适用。
: 1. 两边或者四边贴胶带
: 2. 盖玻片四角粘一丁点儿modeling clay，用镊子轻轻挤压可以调节高度
: 3. 注射器里装vaseline后装200 ul枪头，在载玻片上划一圈，但是要留个孔来排空气
: ，然后加样本和盖玻片。这个方法不熟练的话会弄得vaseline到处都是。不推荐。不过
: 我经常用
: 4. 也许可以用PAP pen多涂几层。我觉得这个方法如果可行的话应该是最方便的了。
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c*********r
发帖数: 1312 | 9 图片有点大贴不上来，放dropbox里了：
https://www.dropbox.com/s/yiajy9y6ppp6czh/WP_20140117_002.jpg
胶带如图一里的两种都可以，我没用过，我们实验室的在用，他们的样本在100微米左
右，可以贴多层。
其他两种方法见图二图三
mounting medium我会根据面积和厚度算好体积之后加差不多，然后指甲油封片，不容
易干。个人经验。
【在 D*a 的大作中提到】
: 好经验！
: 贴胶带是那种纸的tap还塑料的？modeling clay是橡皮泥？vaseline是那个护手霜还是
: 实验室的产品？
: 同样的问题就是mounting medium是不是要多加，会不会干掉？
: PAP pen感觉堆不起来，估计前三种选一种吧
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c*********r
发帖数: 1312 | 10 modeling clay应该是橡皮泥一类的。
【在 D*a 的大作中提到】
: 好经验！
: 贴胶带是那种纸的tap还塑料的？modeling clay是橡皮泥？vaseline是那个护手霜还是
: 实验室的产品？
: 同样的问题就是mounting medium是不是要多加，会不会干掉？
: PAP pen感觉堆不起来，估计前三种选一种吧
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z*******6
发帖数: 679 | 11 我做动脉的whole mount staining，就用的sunnyday的方法，结果发现太厚了... 估计
下次就不用parafilm了... 估计动脉没那么厚...
【在 s******y 的大作中提到】
: 最简单的办法，就是用parafilm剪一个洞，然后贴在玻璃片上，然后小心的把样品放在
: 中间的空洞里，然后加mounting medium, 然后封装。
: 如果你要更fancy 的话，貌似某些公司有一定厚度的spacer 卖。但是我实在想不起是
: 哪个公司了。
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D*a
发帖数: 6830 | 12 太详细啦，感谢！
【在 c*********r 的大作中提到】
: 图片有点大贴不上来，放dropbox里了：
: https://www.dropbox.com/s/yiajy9y6ppp6czh/WP_20140117_002.jpg
: 胶带如图一里的两种都可以，我没用过，我们实验室的在用，他们的样本在100微米左
: 右，可以贴多层。
: 其他两种方法见图二图三
: mounting medium我会根据面积和厚度算好体积之后加差不多，然后指甲油封片，不容
: 易干。个人经验。
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s******y
发帖数: 28562 | 13 能。
不要剪太大一张，小小的一张能够被盖玻片盖住就行了。
如果发现可能太厚（刚才有个网友说的），可以先拉一拉，拉薄了再剪就好了。
【在 D*a 的大作中提到】
: parafilm 能被mounting medium粘住吗，四周还是照样指甲油封？会不会干掉了？
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D*a
发帖数: 6830 | 14 好办法，下次厚的试试parafilm，薄的试试胶带
【在 s******y 的大作中提到】
: 能。
: 不要剪太大一张，小小的一张能够被盖玻片盖住就行了。
: 如果发现可能太厚（刚才有个网友说的），可以先拉一拉，拉薄了再剪就好了。
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a*q
发帖数: 2109 | 15 Grace Biolabs有spacer卖。
另外双面胶的厚度大概130微米左右。
【在 s******y 的大作中提到】
: 最简单的办法，就是用parafilm剪一个洞，然后贴在玻璃片上，然后小心的把样品放在
: 中间的空洞里，然后加mounting medium, 然后封装。
: 如果你要更fancy 的话，貌似某些公司有一定厚度的spacer 卖。但是我实在想不起是
: 哪个公司了。
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D*a
发帖数: 6830 | 16 多谢！
【在 a*q 的大作中提到】
: Grace Biolabs有spacer卖。
: 另外双面胶的厚度大概130微米左右。
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l**********1
发帖数: 5204 | 17 which method worked now for 120 um sample depth ?
purchased spacer:
http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/S24737
or PAFilm by hand made ?
标 题: Re: 厚切片做confocal怎么封片不被压扁？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jan 19 14:56:06 2014, 美东)
多谢！
【在 a*q 的大作中提到】
: Grace Biolabs有spacer卖。
: 另外双面胶的厚度大概130微米左右。
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s******e
发帖数: 370 | 18 我用过金属螺丝垫圈，英文是叫washer。就是要用能干的mounting medium
再厚的sample，比如整个embryo，我曾经自己用玻璃做holder，里面盛BABB
很简单的，裁几块slide，super glue |
b******s
发帖数: 1089 | 19 要是你觉得很多垫片不容易封片的话，可以试试撒几粒arabidopsis seeds(要是你有朋
友做植物，可以要一管，够你用十年的）。可以垫高盖玻片。
【在 D*a 的大作中提到】
: 比如切50微米，或者更厚一点的切片，然后放到片子上做confocal，求能保存组织厚度
: 做Z轴的产品，或者大家都是怎么封的，求推荐。50微米只是暂定的，如果能再厚一点
: 更好。
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D*a
发帖数: 6830 | 20 话说我上次封了几个E11和E10,感觉激光完全透不过去啊，而且如果前几层有大量绿荧
光的话，后面几层荧光虽然变成背景了但是还是有绿噪点，我根本没找着我想看的器官
。不知道是不是我们confocal的问题？
那几个片子我后来又扒开把器官解剖出来了，简直是天上地下啊，后来的胚胎我只能先
解剖再做whole mount，不敢直接封了。
问题是这样的话我跟前人的数据比较起来就有问题，难道为了比较只能跟他那样把整个
胚胎切了...想偷懒也没偷成..... |
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c*********r
发帖数: 1312 | 21 我们用Leica SP5，普通的confocal，激光最多穿透个100多micron。用two photon
confocal会更好些，但也只是几百micron吧。
【在 D*a 的大作中提到】
: 话说我上次封了几个E11和E10,感觉激光完全透不过去啊，而且如果前几层有大量绿荧
: 光的话，后面几层荧光虽然变成背景了但是还是有绿噪点，我根本没找着我想看的器官
: 。不知道是不是我们confocal的问题？
: 那几个片子我后来又扒开把器官解剖出来了，简直是天上地下啊，后来的胚胎我只能先
: 解剖再做whole mount，不敢直接封了。
: 问题是这样的话我跟前人的数据比较起来就有问题，难道为了比较只能跟他那样把整个
: 胚胎切了...想偷懒也没偷成.....
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s******e
发帖数: 370 | 22 E11不透明是肯定透不过去的
现在围绕这个透明的技术越来越多，但是都不好做……
最简单的还是染色，然后脱水，BABB，荧光强的话还是可以的
要不然就只有扒开tissue暴露你要的部分，我从前做过很多脑神经的microdissection
，只是花时间，image下来还是很好看的 |
D*a
发帖数: 6830 | 23 我的sample E11的爪子下面就看不着了，估计那肯定没有100 micron吧..
【在 c*********r 的大作中提到】
: 我们用Leica SP5，普通的confocal，激光最多穿透个100多micron。用two photon
: confocal会更好些，但也只是几百micron吧。
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c*********r
发帖数: 1312 | 24 我不做老鼠，我也不知道。。。
【在 D*a 的大作中提到】
: 我的sample E11的爪子下面就看不着了，估计那肯定没有100 micron吧..
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