C******2
发帖数: 97 | 1 求助各位作ＨＢＶ的行家，我是最近才接触这个领域，我想在ｈｕｈ７ 或者Ｈｅｐｇ
２中稳定表达ＨＢＶ Ｂ型的侵染性克隆（４．３Ｋ），试了几次都没有成功，用ｌｅ
ｎｔｉ载体又由于插入片段过大，ｔｉｔｅｒ过低不能造成有效的感染，我的感觉是稳
定表达ＨＢＶ的ＨＵＨ７ 细胞好像由于ａｐｏｐｔｏｓｉｓ不能进行正常的生长，请
问大家，有这种可能么？或者大家有什么建议，请不吝赐教
非常感谢各位的帮助 |
n********e
发帖数: 1630 | 2 paper多如牛毛 你要的是transient transfection 还是 constitute transfection |
d****i
发帖数: 2346 | 3 HBV不能感染体外培养HepG2或者Huh7。不知道你的实验目的，要长期表达，不是有2215
细胞系吗？目前能被感染的细胞系是HepaRG
http://www.pnas.org/content/99/24/15655
可能还有一种细胞系，我忘记了。 |
j****x
发帖数: 1704 | 4 建立HBV expressing cell line，用HuH7大概不是个好选择，因为其分化程度低且敏感
，病毒在其中的复制效率相对较低，比不上HepG2。
此外，如果你想建立表达HBV Genotype B型的细胞系，必须要筛选细胞培养适应性病毒
株，而不能直接用患者体内分离到的毒株或者所谓基因型“标准株”，因为这些
clinical isolates在细胞培养条件下的复制能都很差，需要在体外培养条件下积攒一
系列的适应性突变才有可能在细胞系中高表达，尤其对于本身复制能力就相对差的B型
HBV病毒。目前广泛使用的几种HBV expressing cell line例如HepG2.2.15/HepG2 H1.3
等，都采取了类似的策略。 |
C******2
发帖数: 97 | 5 谢谢你的关注，我在这个领域是新手。
只是单纯的想在huh7 或者hepg2中稳定表达我的Hbv B型侵染性克隆，感觉转然后，
elisa 能够监测到抗原， 感觉无论是哪种细胞，稳定表达hbv b 型后都会凋亡，有这
种可能么，或者您有什么别的建议？谢谢
【在 n********e 的大作中提到】
: paper多如牛毛 你要的是transient transfection 还是 constitute transfection
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C******2
发帖数: 97 | 6 不是感染，是稳定表达HBv B型的稳转细胞系，
2215 是D型的，我现在想做B型的。细胞凋亡，有可能么？
2215
【在 d****i 的大作中提到】
: HBV不能感染体外培养HepG2或者Huh7。不知道你的实验目的，要长期表达，不是有2215
: 细胞系吗？目前能被感染的细胞系是HepaRG
: http://www.pnas.org/content/99/24/15655
: 可能还有一种细胞系，我忘记了。
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C******2
发帖数: 97 | 7 感谢您的关注，
现在病毒的复制效率还不是我最关键的问题， 至少我用侵染性克隆HBV-B-1.3转染细胞
后，上清里海是能够检测到抗原的，我是想在huh7 或者hepg2中稳定表达我的侵染性克
隆，发现细胞可能存在凋亡，
我开始的想法就是做个稳转克隆，类似的克隆在其他细胞系中我已经做过很多了，没想
到这个这么麻烦，稳定表达HBV-B-1.3细胞似乎不能持续生长，请问您有什么建议么？
肝炎病毒方便完全新手，谢谢指教
.3
【在 j****x 的大作中提到】
: 建立HBV expressing cell line，用HuH7大概不是个好选择，因为其分化程度低且敏感
: ，病毒在其中的复制效率相对较低，比不上HepG2。
: 此外，如果你想建立表达HBV Genotype B型的细胞系，必须要筛选细胞培养适应性病毒
: 株，而不能直接用患者体内分离到的毒株或者所谓基因型“标准株”，因为这些
: clinical isolates在细胞培养条件下的复制能都很差，需要在体外培养条件下积攒一
: 系列的适应性突变才有可能在细胞系中高表达，尤其对于本身复制能力就相对差的B型
: HBV病毒。目前广泛使用的几种HBV expressing cell line例如HepG2.2.15/HepG2 H1.3
: 等，都采取了类似的策略。
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j****x
发帖数: 1704 | 8 你用的什么筛选标记，之前做TITRATION了没？整合表达HBV基因组是不大可能诱导凋亡
的（除非你这是个特殊克隆），不能持续生长可能是存在其他的抑制性因素，先检查一
下你的培养条件吧。
【在 C******2 的大作中提到】
: 感谢您的关注，
: 现在病毒的复制效率还不是我最关键的问题， 至少我用侵染性克隆HBV-B-1.3转染细胞
: 后，上清里海是能够检测到抗原的，我是想在huh7 或者hepg2中稳定表达我的侵染性克
: 隆，发现细胞可能存在凋亡，
: 我开始的想法就是做个稳转克隆，类似的克隆在其他细胞系中我已经做过很多了，没想
: 到这个这么麻烦，稳定表达HBV-B-1.3细胞似乎不能持续生长，请问您有什么建议么？
: 肝炎病毒方便完全新手，谢谢指教
:
: .3
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n********e
发帖数: 1630 | 9 病毒复制怎么会导致细胞裂解，hbv is non cytopathic |
f*******h
发帖数: 38 | 10 你HepG2转染效率有多高？这细胞不太好转，效率低，也很容易被转死。
你HBV1.3质粒用的啥载体？ 会不会抗性不对？
lenti可以试试HBV1.1，稍微小点，Jutao Guo的几个cellline就是这么做的
【在 C******2 的大作中提到】
: 感谢您的关注，
: 现在病毒的复制效率还不是我最关键的问题， 至少我用侵染性克隆HBV-B-1.3转染细胞
: 后，上清里海是能够检测到抗原的，我是想在huh7 或者hepg2中稳定表达我的侵染性克
: 隆，发现细胞可能存在凋亡，
: 我开始的想法就是做个稳转克隆，类似的克隆在其他细胞系中我已经做过很多了，没想
: 到这个这么麻烦，稳定表达HBV-B-1.3细胞似乎不能持续生长，请问您有什么建议么？
: 肝炎病毒方便完全新手，谢谢指教
:
: .3
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b*******6
发帖数: 39 | 11 需要在体外培养条件下积攒一系列的适应性突变才有可能在细胞系中高表达
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HBV是怎么做到的，我知道HCV作为RNA病毒很容易突变能够找到一些适应性突变，HBV适
应性突变是怎么做到的，能给一些参考文献嘛？
.3
【在 j****x 的大作中提到】
: 建立HBV expressing cell line，用HuH7大概不是个好选择，因为其分化程度低且敏感
: ，病毒在其中的复制效率相对较低，比不上HepG2。
: 此外，如果你想建立表达HBV Genotype B型的细胞系，必须要筛选细胞培养适应性病毒
: 株，而不能直接用患者体内分离到的毒株或者所谓基因型“标准株”，因为这些
: clinical isolates在细胞培养条件下的复制能都很差，需要在体外培养条件下积攒一
: 系列的适应性突变才有可能在细胞系中高表达，尤其对于本身复制能力就相对差的B型
: HBV病毒。目前广泛使用的几种HBV expressing cell line例如HepG2.2.15/HepG2 H1.3
: 等，都采取了类似的策略。
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C******2
发帖数: 97 | 12 一语点醒我了，十分感谢。
【在 n********e 的大作中提到】
: 病毒复制怎么会导致细胞裂解，hbv is non cytopathic
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