i*********0 发帖数: 915 | |
M*P 发帖数: 6456 | 2 no polyA tail.
【在 i*********0 的大作中提到】 : 能做cDNA synthesis么?
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j****x 发帖数: 1704 | 3 RT
【在 i*********0 的大作中提到】 : 能做cDNA synthesis么?
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c********b 发帖数: 363 | 4 wrong (or at least inaccurate) answer
【在 M*P 的大作中提到】 : no polyA tail.
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s******s 发帖数: 13035 | 5 有啊。有时候会克隆出来
【在 i*********0 的大作中提到】 : 能做cDNA synthesis么?
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i*********0 发帖数: 915 | 6 谢谢啦!如果我看到一个gene intron表达是在control 和mutant里面比较一致,但是
检测exon的水平有差异的话,是不是表明,这个gene的转录后调控出了问题? |
s******r 发帖数: 1245 | 7 你能肯定不是genomic dna contamination?
【在 i*********0 的大作中提到】 : 谢谢啦!如果我看到一个gene intron表达是在control 和mutant里面比较一致,但是 : 检测exon的水平有差异的话,是不是表明,这个gene的转录后调控出了问题?
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i*********0 发帖数: 915 | 8 做cDNA synthesis之前做了DNAse 1的处理。在去qPCR的时候,我同时做了这个gene的
exon,3‘UTR 和2个introns的PCR,exon和3’UTR 有3倍的表达差异,两个intron都没
有差异。 |
m******u 发帖数: 12400 | 9 能确认这是pre-mRNA,而不是alternative splicing产物?若是后者,这应该算是成熟
的mRNA。
严格意义上pre-mRNA是没有poly(A)的,更严格意义上说,是没有pre-mRNA这个东西
的,因为转录过程中,帽子已经加上了,前边的intron已经间接了。
(当然,因为细胞内的所有的代谢过程是会出错的,很短很小的转录本(含一或两个内
含子的)肯定会有没被剪接的内含子,在外在变现就是有poly(A)tail的 pre-mRNA)。
发信人: shakuras (doskey), 信区: Biology
标 题: Re: premRNA也有polyA tail么?
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Feb 25 10:47:25 2014, 美东)
有啊。有时候会克隆出来 |
s******r 发帖数: 1245 | 10 dnase处理不一定是完全的,需要做no RT control来排除
【在 i*********0 的大作中提到】 : 做cDNA synthesis之前做了DNAse 1的处理。在去qPCR的时候,我同时做了这个gene的 : exon,3‘UTR 和2个introns的PCR,exon和3’UTR 有3倍的表达差异,两个intron都没 : 有差异。
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j****x 发帖数: 1704 | 11
这个也可以叫pre-mRNA
)。
【在 m******u 的大作中提到】 : 能确认这是pre-mRNA,而不是alternative splicing产物?若是后者,这应该算是成熟 : 的mRNA。 : 严格意义上pre-mRNA是没有poly(A)的,更严格意义上说,是没有pre-mRNA这个东西 : 的,因为转录过程中,帽子已经加上了,前边的intron已经间接了。 : (当然,因为细胞内的所有的代谢过程是会出错的,很短很小的转录本(含一或两个内 : 含子的)肯定会有没被剪接的内含子,在外在变现就是有poly(A)tail的 pre-mRNA)。 : 发信人: shakuras (doskey), 信区: Biology : 标 题: Re: premRNA也有polyA tail么? : 发信站: BBS 未名空间站 (Tue Feb 25 10:47:25 2014, 美东) : 有啊。有时候会克隆出来
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i*********0 发帖数: 915 | 12 good comments! Thanks!
【在 s******r 的大作中提到】 : dnase处理不一定是完全的,需要做no RT control来排除
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s******s 发帖数: 13035 | 13 你搞啥捏。没出核的就是pre-mRNA啊。
细胞里面基本是先polyA再剪切的,polyT调出来的RNA
很多有intron, 当然取决于抽提方法,尽量保留核结构
大多数就出不来了
)。
【在 m******u 的大作中提到】 : 能确认这是pre-mRNA,而不是alternative splicing产物?若是后者,这应该算是成熟 : 的mRNA。 : 严格意义上pre-mRNA是没有poly(A)的,更严格意义上说,是没有pre-mRNA这个东西 : 的,因为转录过程中,帽子已经加上了,前边的intron已经间接了。 : (当然,因为细胞内的所有的代谢过程是会出错的,很短很小的转录本(含一或两个内 : 含子的)肯定会有没被剪接的内含子,在外在变现就是有poly(A)tail的 pre-mRNA)。 : 发信人: shakuras (doskey), 信区: Biology : 标 题: Re: premRNA也有polyA tail么? : 发信站: BBS 未名空间站 (Tue Feb 25 10:47:25 2014, 美东) : 有啊。有时候会克隆出来
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