r******k
发帖数: 446 | 1 如果按着lipo2000说明书上写的 在90%左右 cell confluence的时候做transfection，
那第二天细胞就长的满满的了，这能行吗？ 是不是有contact inhibition？等细胞长
的很满了， 我可否trypsinize 然后转到更大的dish里面养？ |
j****t
发帖数: 1663 | 2 我一般是70-80%confluence的时候做transfection，这个也要看什么样的细胞，有些细
胞分裂速度慢，多铺一些细胞应该也没有关系。
如果你已经用lipo2000做了transfection，我觉得第二天就trypsinize不太好。
建议你下次转一个带荧光的质粒，看看转染效率，这样你就知道铺多少细胞最好了。 |
r******k
发帖数: 446 | 3 Hi thx! 我带了一个RFP。 用的293t, 长的太快了。 果然是even water 也 growth的
293t. 但是现在细胞长的太满了，第一天也就80% confluence的样子。 现在传染的
efficiency也就40%。
【在 j****t 的大作中提到】
: 我一般是70-80%confluence的时候做transfection，这个也要看什么样的细胞，有些细
: 胞分裂速度慢，多铺一些细胞应该也没有关系。
: 如果你已经用lipo2000做了transfection，我觉得第二天就trypsinize不太好。
: 建议你下次转一个带荧光的质粒，看看转染效率，这样你就知道铺多少细胞最好了。
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j****t
发帖数: 1663 | 4 恩，293是长得比较快。下次铺细胞是计一下数，确定你铺的是70-80%confluence
另外，还有你也可以试试其他的transfection reagents 来提高转染效率，例如CaCl2
， PEI (Polyethylenimine），Turbofect from Thermo-Fermentas |
r******k
发帖数: 446 | 5 非常感谢！
CaCl2
【在 j****t 的大作中提到】
: 恩，293是长得比较快。下次铺细胞是计一下数，确定你铺的是70-80%confluence
: 另外，还有你也可以试试其他的transfection reagents 来提高转染效率，例如CaCl2
: ， PEI (Polyethylenimine），Turbofect from Thermo-Fermentas
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