o**4
发帖数: 35028 | 1 我提了RNA，然后反转录了，
做realtime 的时候，ct值偏大，有什么办法预先扩增下呢？
非常感谢 |
M**a
发帖数: 4816 | 2 做过无数次single cell qRT-PCR,也做过single bacterial RNA-seq,
你的问题，解决方法有：
1）换更高效率的RNA isolation kit, 和cDNA synthesis kit
2) 在RT的时候加目标基因的引物
3）预扩增是下下策的方法：先在PCR仪上预走6-9个PCR循环，再上qPCR mechine
祝好运！
【在 o**4 的大作中提到】
: 我提了RNA，然后反转录了，
: 做realtime 的时候，ct值偏大，有什么办法预先扩增下呢？
: 非常感谢
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o**4
发帖数: 35028 | 3 1. 能推荐下高效率的kit吗？
2. RT的时候能同时加很多引物吗？我现在RT做完了已经，没法补救了吧？
3. 预扩增为啥是下下策呢？ 预扩增也应该用做qRT-PCR的master mix吗？
非常感谢，请查收包子啊
【在 M**a 的大作中提到】
: 做过无数次single cell qRT-PCR,也做过single bacterial RNA-seq,
: 你的问题，解决方法有：
: 1）换更高效率的RNA isolation kit, 和cDNA synthesis kit
: 2) 在RT的时候加目标基因的引物
: 3）预扩增是下下策的方法：先在PCR仪上预走6-9个PCR循环，再上qPCR mechine
: 祝好运！
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M**a
发帖数: 4816 | 4 1) Zymo microRNA isolation kit; Invitrogen Vilo cDNA synthesis
2) 对，可以加你想加的引物：注意浓度要比qPCR时用的少1-2个数量级；补救go to 3)
3）我们是这样做的。
不客气。Good luck!
【在 o**4 的大作中提到】
: 1. 能推荐下高效率的kit吗？
: 2. RT的时候能同时加很多引物吗？我现在RT做完了已经，没法补救了吧？
: 3. 预扩增为啥是下下策呢？ 预扩增也应该用做qRT-PCR的master mix吗？
: 非常感谢，请查收包子啊
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o**4
发帖数: 35028 | 5 1. 为啥是microRNA isolation kit呢？
2. 我现在手头已经是cDNA了，没办法了吧？
3. 你们做的预扩增？
非常谢谢
3)
【在 M**a 的大作中提到】
: 1) Zymo microRNA isolation kit; Invitrogen Vilo cDNA synthesis
: 2) 对，可以加你想加的引物：注意浓度要比qPCR时用的少1-2个数量级；补救go to 3)
: 3）我们是这样做的。
: 不客气。Good luck!
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M**a
发帖数: 4816 | 6 microRNA 这里不是small RNA,只是取 微 的意思。
【在 o**4 的大作中提到】
: 1. 为啥是microRNA isolation kit呢？
: 2. 我现在手头已经是cDNA了，没办法了吧？
: 3. 你们做的预扩增？
: 非常谢谢
:
: 3)
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M**a
发帖数: 4816 | 7 2），3）只有表达量很低的基因我们用了预扩增。
PS，我暗器给你我们原来的单位你去查查几篇相关文献。。
答案都在那儿了。
【在 o**4 的大作中提到】
: 1. 为啥是microRNA isolation kit呢？
: 2. 我现在手头已经是cDNA了，没办法了吧？
: 3. 你们做的预扩增？
: 非常谢谢
:
: 3)
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o**4
发帖数: 35028 | 8 非常感谢
【在 M**a 的大作中提到】
: 2），3）只有表达量很低的基因我们用了预扩增。
: PS，我暗器给你我们原来的单位你去查查几篇相关文献。。
: 答案都在那儿了。
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c********9
发帖数: 562 | 9 for the kit, you can try RNeasy Mini Kit (74104, QIAGEN)
【在 o**4 的大作中提到】
: 1. 能推荐下高效率的kit吗？
: 2. RT的时候能同时加很多引物吗？我现在RT做完了已经，没法补救了吧？
: 3. 预扩增为啥是下下策呢？ 预扩增也应该用做qRT-PCR的master mix吗？
: 非常感谢，请查收包子啊
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x********e
发帖数: 35261 | 10 这kit超级难用，single cell提RNA还能提出来？
【在 c********9 的大作中提到】
: for the kit, you can try RNeasy Mini Kit (74104, QIAGEN)
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z*******6
发帖数: 679 | 11 号称可以RNA amplification的吧？... |
o**4
发帖数: 35028 | 12 大量细胞还好用啊
微量没试过
【在 x********e 的大作中提到】
: 这kit超级难用，single cell提RNA还能提出来？
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