b**********8
发帖数: 349 | 1 最近发现一个基因，肝癌里面高表达，用siRNA敲除后，细胞增殖受抑制，细胞周期分
析发现被阻滞在S期，做western 发现cyclin D1 明显上调，请问怎么解释？有什么好
的思路可以继续下去吗？谢谢各位大神！ |
f******g
发帖数: 1003 | 2 Sirna 是瞬时敲降吧，另外，要验证其敲降效率，还要多选几条siRNA以防止off-
target.
你过表达d1，看看liver cell是否剧烈增殖，改变细胞周期。移植入小鼠，是否成瘤。
然后就是机制探讨。往各种通路上扯关系。
读文献，is cyclin d1 ko available ? 看看有什么和你的发现一致的表型。
如果胚胎致死，看看条件瞧出有吗，cross with liver-specific cre.
昨天刚刚看到一篇文章，说d1敲除小鼠无血细胞了，估计是胚胎致死 |
b**********8
发帖数: 349 | 3 谢谢你的回复。所有的实验都是用一条阴性对照，两条不同位点的siRNA，细胞周期和
cyclin D1表达变化都是一致的。
另外，可能我没表达清楚我的意思，我的问题是，对于S期阻滞的情况，既往文献一般
都报道cyclin D1表达是下调的，为何我这里反而上调了？
【在 f******g 的大作中提到】
: Sirna 是瞬时敲降吧，另外，要验证其敲降效率，还要多选几条siRNA以防止off-
: target.
: 你过表达d1，看看liver cell是否剧烈增殖，改变细胞周期。移植入小鼠，是否成瘤。
: 然后就是机制探讨。往各种通路上扯关系。
: 读文献，is cyclin d1 ko available ? 看看有什么和你的发现一致的表型。
: 如果胚胎致死，看看条件瞧出有吗，cross with liver-specific cre.
: 昨天刚刚看到一篇文章，说d1敲除小鼠无血细胞了，估计是胚胎致死
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a*******a
发帖数: 4233 | 4 d1下调是block在g1后期的checkpoint上，有了足够的D1细胞内rb磷酸化推动细胞进去s期
你的数据可以这么解释
d1太多，导致不成熟的细胞提前进入s期，通不过s期检验点。
可能你首先需要做个同步化看看是不是加速进s期，rb磷酸化如何
然后看看dsb如何，s期检验点查什么东西。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 谢谢你的回复。所有的实验都是用一条阴性对照，两条不同位点的siRNA，细胞周期和
: cyclin D1表达变化都是一致的。
: 另外，可能我没表达清楚我的意思，我的问题是，对于S期阻滞的情况，既往文献一般
: 都报道cyclin D1表达是下调的，为何我这里反而上调了？
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b**********8
发帖数: 349 | 5 谢谢，你的意见对我很有启发，不知道你有没有可以参考的paper？
去s期
【在 a*******a 的大作中提到】
: d1下调是block在g1后期的checkpoint上，有了足够的D1细胞内rb磷酸化推动细胞进去s期
: 你的数据可以这么解释
: d1太多，导致不成熟的细胞提前进入s期，通不过s期检验点。
: 可能你首先需要做个同步化看看是不是加速进s期，rb磷酸化如何
: 然后看看dsb如何，s期检验点查什么东西。
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