l***i
发帖数: 36 | 1 We already know there is a protein A have full length and truncated two
isoforms. The full length isoform shares the same sequence as truncated one.
How could I generate antibody that can only recognize truncated isoform in
flow or immune fluorecent staining. Thanks. |
B******o
发帖数: 496 | 2 用truncated蛋白制备抗体，回来以后过全长蛋白的柱子把抗体纯化一遍？
one.
in
【在 l***i 的大作中提到】
: We already know there is a protein A have full length and truncated two
: isoforms. The full length isoform shares the same sequence as truncated one.
: How could I generate antibody that can only recognize truncated isoform in
: flow or immune fluorecent staining. Thanks.
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l***i
发帖数: 36 | 3 truncated 蛋白和全长蛋白序列一样，过柱子不就全部吸附了，特异识别truncated的
怎么会flow through？ |
H****s
发帖数: 301 | 4 这个问题不是太好回答。
（1）。你这个基因是不是膜蛋白？如果全长蛋白和truncated isoform都是膜蛋白的话
，你的选择是做cDNA免疫大鼠或者是小鼠，然后用细胞表面表达全长蛋白和truncated
isoform的细胞来做筛选。这个过程大概需要3-6个月，看做事的人的效率和运气。
（2）。如果不是膜蛋白，并且你可以表达和纯化这两个蛋白。你的选择有以下两种：
第一种：用truncated isoform免疫大鼠或者是小鼠，然后通过杂交瘤的方法来筛选符
合你要求的抗体。这个抗体很可能识别由于truncation所造成的构象变化。这个过程大
概也需要6个月，看做事的人的效率和运气。
第二种：如果你有资源和人脉，可以使用体外抗体展示的技术（比如，噬菌体展示或者
是酵母展示）。这个应该比较简单一些。这个过程大概需要3个月，看做事的人的效率。
如果你实验室不缺钱的话，就找两个做抗体的CRO，在谈条件的时候说好，拿不到你需
要的抗体不付钱就行了（这招有点损，版上开公司的同学可能会不高兴）。如果我是你
，我会选择这个。因为你可以花时间去做真正的科学研究，而不是把你的时间都浪费在
创造实验条件上面。
one.
in
【在 l***i 的大作中提到】
: We already know there is a protein A have full length and truncated two
: isoforms. The full length isoform shares the same sequence as truncated one.
: How could I generate antibody that can only recognize truncated isoform in
: flow or immune fluorecent staining. Thanks.
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l***i
发帖数: 36 | 5 感谢回复，首先这个蛋白在细胞内，因此用truncated isoform 免疫后再筛选或许会更
有效一些。正如您所说的时间应该花在科研上而不是创造实验条件上，如果您知道有什
么公司可以提供一条龙服务，可否提供相关信息。Thanks. |
h*******o
发帖数: 4884 | 6 不清楚，不过我看我买的抗体上一般都是用peptide 来做抗原
你可以把truncated 的缺失的那一部分去做抗原吧 |
H****s
发帖数: 301 | 7 这个建议不错，一般而言，多肽是不能做抗原的，因为免疫原性太弱，都是和其它免疫
原比如KLH一起。
具体的公司我就不推荐了，因为我不熟悉，不想误了你的事。你多打几个电话问问吧。
Genscript不太推荐，曾经误了我的事，浪费了半年的时间。到现在都不从他们那里买
东西。
【在 h*******o 的大作中提到】
: 不清楚，不过我看我买的抗体上一般都是用peptide 来做抗原
: 你可以把truncated 的缺失的那一部分去做抗原吧
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