K********g 发帖数: 58 | 1 为什么张峰实验室的293细胞never reach over 75 % confluence
有什么说法吗?谢谢 |
K********g 发帖数: 58 | 2 还有,构建了几个gRNA质粒,U6 Promoter 第一个不是G,要重新构建吗?THANKS |
C*********h 发帖数: 83 | 3 转录不了。
【在 K********g 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 还有,构建了几个gRNA质粒,U6 Promoter 第一个不是G,要重新构建吗?THANKS
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s******s 发帖数: 13035 | 4 不知道crispr啥protocol,以前实验室产病毒,293T也是不能confluent
【在 K********g 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 为什么张峰实验室的293细胞never reach over 75 % confluence : 有什么说法吗?谢谢
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c****r 发帖数: 9 | 5 应该没问题。U6 起始可用A或G。如果第一个不是A或G,则从其后第一个A货G起始,这
样你的gRNA会缺失几个碱基。而gRNA缺失三个碱基并不影响功能,反而提高专一性。
关于U6 promoter的起始,可参考: http://www.nature.com/mtna/journal/v3/n5/full/mtna201412a.html
【在 K********g 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 还有,构建了几个gRNA质粒,U6 Promoter 第一个不是G,要重新构建吗?THANKS
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K********g 发帖数: 58 | |