r***l
发帖数: 593 | 1 我们用预先导入A基因的Phoenix-ECO cell去转染T cell，但是flow看不到A基因的表达
。人家说你可以先run flow看看Phoenix-ECO cell里面这个基因是否表达？
很好奇Phoenix-ECO cell会直接表达这个基因吗？用PCR check是不是有A基因的DNA才
对吧？
不是很懂，请大侠帮忙看看，谢谢！ |
s******s
发帖数: 13035 | 2 你用啥promoter？没有TF或者clone出错，
没有表达吗mRNA自然看不到。产病毒的时候，
有病毒RNA可以表达。
【在 r***l 的大作中提到】
: 我们用预先导入A基因的Phoenix-ECO cell去转染T cell，但是flow看不到A基因的表达
: 。人家说你可以先run flow看看Phoenix-ECO cell里面这个基因是否表达？
: 很好奇Phoenix-ECO cell会直接表达这个基因吗？用PCR check是不是有A基因的DNA才
: 对吧？
: 不是很懂，请大侠帮忙看看，谢谢！
|
C*******4
发帖数: 400 | 3 应该会表达，试试包装一个GFP的病毒重复一下你的实验你就能看到这个细胞里面有表
达（因为一般是做转染瞬间表达）。再用它感染你的T细胞。就可以直接检测荧光赖看
表达了，在知道大概的感染效率之后再做FLOW才有意义因为有时候病毒滴度太低你的检
测很难。。 |
s******s
发帖数: 13035 | 4 包装细胞里面表达不等于在实验细胞里面表达。我前面说了，实验细胞里面是否表达
取决于promoter，包装细胞估计产生的病毒RNA直接当mRNA用了，所以总是有表达。
【在 C*******4 的大作中提到】
: 应该会表达，试试包装一个GFP的病毒重复一下你的实验你就能看到这个细胞里面有表
: 达（因为一般是做转染瞬间表达）。再用它感染你的T细胞。就可以直接检测荧光赖看
: 表达了，在知道大概的感染效率之后再做FLOW才有意义因为有时候病毒滴度太低你的检
: 测很难。。
|
r***l
发帖数: 593 | 5 谢谢大家，检测了发现包装细胞有表达，就是转染后没有，可能没转进去！
t cell好难转-_-|| |
C*******4
发帖数: 400 | 6 呵呵，我们说的没矛盾啊。一般用CMV启动子在实验细胞里面应该有表达。
他的问题可能是病毒滴度低，所有我要他从头开始就用GFP做快检的指针。
再有，如果是RETRO病毒，碰到不怎么分裂的细胞转导效率很低。可以用LENTI病毒做。
即使病毒没大问题，转导的条件有时候是比较TRICKY的。
的检
【在 s******s 的大作中提到】
: 包装细胞里面表达不等于在实验细胞里面表达。我前面说了，实验细胞里面是否表达
: 取决于promoter，包装细胞估计产生的病毒RNA直接当mRNA用了，所以总是有表达。
|
s******s
发帖数: 13035 | 7 嗯。不过CMV最好早点看，有些细胞里面会被silence掉
有表
赖看
【在 C*******4 的大作中提到】
: 呵呵，我们说的没矛盾啊。一般用CMV启动子在实验细胞里面应该有表达。
: 他的问题可能是病毒滴度低，所有我要他从头开始就用GFP做快检的指针。
: 再有，如果是RETRO病毒，碰到不怎么分裂的细胞转导效率很低。可以用LENTI病毒做。
: 即使病毒没大问题，转导的条件有时候是比较TRICKY的。
:
: 的检
|
r***l
发帖数: 593 | 8 ，确实是retro，所以条件很难摸！
有表
赖看
【在 C*******4 的大作中提到】
: 呵呵，我们说的没矛盾啊。一般用CMV启动子在实验细胞里面应该有表达。
: 他的问题可能是病毒滴度低，所有我要他从头开始就用GFP做快检的指针。
: 再有，如果是RETRO病毒，碰到不怎么分裂的细胞转导效率很低。可以用LENTI病毒做。
: 即使病毒没大问题，转导的条件有时候是比较TRICKY的。
:
: 的检
|
