请教：用western blot比较蛋白表达量，重复性不好 - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 请教：用western blot比较蛋白表达量，重复性不好

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话题: 蛋白话题: wb话题: 重复性话题: 突变体话题: repeats

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g*****n 发帖数: 241	1 我最近在比较C. elegans不同的突变体里的两个蛋白表达量的变化，结果总是重复性不好。 1：我预测蛋白A在某个突变体里表达量增加，用了两组biological repeats，都很明显。但因为actin量不一样（mutant比wt 的actin少5倍，但蛋白A的量反而还高一些），我就重新调整了上样量想做个好看的图(technical repeats)，结果调整了之后反而A的增加没有那么明显了，只是略微增高。 2：蛋白B我预测也是在突变体里增加，做了一遍WB很明显，然后做了两个不同的 biological repeats，结果变成了几乎没有变化。我现在纠结的是到底是我WB的技术环节出了问题，还是由于其他什么原因？我觉得1和2 很可能属于不同的原因。 PS：我用来做比较的WB条带没有饱和。谢谢大家
z********i 发帖数: 610	2 同样的样品上，2ul 4ul 6ul 8ul，看你能否看到差别。
o*****4 发帖数: 1245	3 1。有可能A降解了，有可能沉淀了（嗯，sds解不了所有的沉淀）。2.biological repeat不出来很正常，多repeat几次看个SEM
g*****n 发帖数: 241	4 谢谢回复和建议。另外有没有可能反复的加热和冰冻造成DTT失活？

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