e*******n
发帖数: 4912 | 1 给个链接
zhenglongpai： 在水木社区看的 6-29 17:23
槐北路： 回复 zhenglongpai :我敢把质粒提交到addgen上，在协和讲座发放质粒，对
自己实验的重复性还是很有胆气的。不过您这帖子反而是那几个cris最愿意看到的。6-
29 21:05
欲翻流云舞： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:11
燕京学社： 回复 槐北路 :韩老师，加油 6-29 21:16
天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:16
天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:17
天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师，上一个表情发错了6-29 21:17
天煞一郎： 回复 槐北路 :真的是韩老师吗？ 6-29 21:17
天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师入驻9吧？ 6-29 21:17
卖糖果的莎莎： 评论@槐北路: 前排膜 6-29 21:18
还有52条回复…
精锐教育
商业推广
智商差不多，学习成绩千差万别。Why？
学霸宝典
heatherDHHY 1
3楼6-29 17:09
操作
这就很尴尬了
槐北路： 有什么可尴尬的，等相关的第二篇文章出来，把那几个满世界造谣的人肉出
来，看看谁尴尬 今天 01:40
泱漭： 回复 槐北路 :赞！ 今天 04:11
heatherDHHY 1
4楼6-29 17:10
操作
他当初那篇文章发在哪来着？
syctoo 14
5楼6-29 17:11
操作
可怕，幸好是男的，不然又得挖怎么上位的
绝命VS愤怒 1
6楼6-29 17:22
操作
链接呢
且依琴瑟长和弦 1
7楼6-29 17:27
操作
韩老师早已有说明，目前的系统还不是太成熟，实验需要高超的技巧，还有很多关键细
节，所以不是每个实验室都能轻易重复出来的。上个月早就有人发文说部分结果重复出
来了。韩老师正在完善他的smart版和2.0，敬请期待吧。另外，如果香山会议Cas大佬
们群起发难的话，那可能醉翁之意不在酒，已经不是单纯的学术探讨了。看过一篇文章
，说屠呦呦和韩春雨们不经意间挑战了学术江湖，深以为然。
zhenglongpai： 这个也是很有可能的，断了很多大佬的财路，牵扯的利益太多。 6-29
17:41
ノ寂 7
8楼6-29 17:51
操作
凯尔特人亚瑟王： @槐北路 6-29 19:21
左小柯day： 回复 凯尔特人亚瑟王 :貌似真是本人 6-29 19:39
还有1条回复…
凯尔特人亚瑟王 5
9楼6-29 19:11
操作
看了之后感觉化生圈真特么乱啊！
凯尔特人亚瑟王 5
10楼6-29 19:15
操作
宇宙机圈里面就没这么乱了
霄瑶艺升 13
11楼6-29 19:30
操作
生化圈堪称金融圈啊
商业推广 智商差不多，学习成绩千差万别。Why
学霸宝典
霄瑶艺升 13
12楼6-29 19:33
操作
韩老师应该还是有真技术的
明日绽放之花 10
13楼6-29 19:34
操作
http://tieba.baidu.com/p/4551838065?pid=92721640137&cid=92725799051&from=prin#92725799051
膜
天煞一郎： 这TM就很尴尬了 6-29 21:21
技校大神5 7
14楼6-29 23:13
操作
不传谣，不信谣
卡戎3521 13
15楼6-29 23:20
操作
6666
支持本土科学家！
enioy阳光 4
16楼今天 01:43
操作
莱索恩小猎 5
17楼今天 01:58
操作
和韩老师合影。。。
上一页
下一页
赞
85 |
p**********l
发帖数: 167 | 2 很反感把这事往民族大义、利益纠葛上扯，就像当年的张生家一样。
科学是纯粹的，能replicate就是能，不能就是不能。 |
l******r
发帖数: 18699 | 3 炸药奖得主的工作你如果不能replicate，打赌你不敢这么说
【在 p**********l 的大作中提到】
: 很反感把这事往民族大义、利益纠葛上扯，就像当年的张生家一样。
: 科学是纯粹的，能replicate就是能，不能就是不能。
|
r*h
发帖数: 24 | 4 问题是这个不是炸药奖的东西，文章中很简单的protocol 无法重复这就是问题，假如
需要什么技巧和关键步骤又为什么不在文章中提及，科研发表的目的就是共享，本人已
重复多次，只是想知道该如何才能让其工作。 |
p**********l
发帖数: 167 | 5 你这是个伪命题
能拿炸药奖的技术，如PCR或iPSC这种，在拿奖之前不知道被重复多少次了
有潜力拿炸药奖的技术，如STAP，该质疑的不还是被质疑了？
【在 l******r 的大作中提到】
: 炸药奖得主的工作你如果不能replicate，打赌你不敢这么说
|
o*****p
发帖数: 2977 | 6 分子生物学实验还要“高超的技巧”，真是闻所未闻。难道是转染的时候需要劈着叉？
6-
【在 e*******n 的大作中提到】
: 给个链接
: zhenglongpai： 在水木社区看的 6-29 17:23
: 槐北路： 回复 zhenglongpai :我敢把质粒提交到addgen上，在协和讲座发放质粒，对
: 自己实验的重复性还是很有胆气的。不过您这帖子反而是那几个cris最愿意看到的。6-
: 29 21:05
: 欲翻流云舞： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:11
: 燕京学社： 回复 槐北路 :韩老师，加油 6-29 21:16
: 天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:16
: 天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:17
: 天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师，上一个表情发错了6-29 21:17
|
n****k
发帖数: 516 | 7 他的原文并没有提及高超的技巧是什么，就这样发表是不是有点欠妥呢。现在的问题是
有和没有结果的区别，而不是编辑效率的区别。如果真的有很多细节的东西，他可以发
一篇NP，这个可以很详细的解释高超的技巧是什么。
6-
【在 e*******n 的大作中提到】
: 给个链接
: zhenglongpai： 在水木社区看的 6-29 17:23
: 槐北路： 回复 zhenglongpai :我敢把质粒提交到addgen上，在协和讲座发放质粒，对
: 自己实验的重复性还是很有胆气的。不过您这帖子反而是那几个cris最愿意看到的。6-
: 29 21:05
: 欲翻流云舞： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:11
: 燕京学社： 回复 槐北路 :韩老师，加油 6-29 21:16
: 天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:16
: 天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:17
: 天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师，上一个表情发错了6-29 21:17
|
D********d
发帖数: 2154 | 8 转染的时候，要默念三次“原力与我同在”，
就可以使用原力敲除基因。
凡是没有原力感应的衰人，是不可能做成功的。 |
|
c********6
发帖数: 693 | 9 这个真的有点扯淡啊，为什么别人去问他的原因，他老是转移话题，而不愿意透露需要
注意的细节呢。这个跟人品有关了啊 |
t**m
发帖数: 158 | 10 这是本人？贴吧？
6-
【在 e*******n 的大作中提到】
: 给个链接
: zhenglongpai： 在水木社区看的 6-29 17:23
: 槐北路： 回复 zhenglongpai :我敢把质粒提交到addgen上，在协和讲座发放质粒，对
: 自己实验的重复性还是很有胆气的。不过您这帖子反而是那几个cris最愿意看到的。6-
: 29 21:05
: 欲翻流云舞： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:11
: 燕京学社： 回复 槐北路 :韩老师，加油 6-29 21:16
: 天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:16
: 天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:17
: 天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师，上一个表情发错了6-29 21:17
|
|
|
t*********2
发帖数: 20 | 11 生物实验需不需要高超技巧，施老师早有定论。
“除了仪器的进步，在施一公看来，他们能领先竞争对手的主要原因是拥有极为成熟的
样品处理方法。“也就是说如何让蛋白质服服帖帖、性质稳定，成为适合结构解析的样
品”，他半开玩笑地说“这是我们的独门绝招，这个绝招即便写出来，别人不在我的实
验室做上一两年也很难理解或吃透，因为这是师傅带徒弟一点点积累起来的。””
即便写出来，别人也不一定能做。。。。
叉？
【在 o*****p 的大作中提到】
: 分子生物学实验还要“高超的技巧”，真是闻所未闻。难道是转染的时候需要劈着叉？
:
: 6-
|
t*********2
发帖数: 20 | 12 生物实验的本质就是个厨子，让厨子公开自己的秘方，确实优点勉为其难 ：）你得去
他饭店偷师啊。
【在 c********6 的大作中提到】
: 这个真的有点扯淡啊，为什么别人去问他的原因，他老是转移话题，而不愿意透露需要
: 注意的细节呢。这个跟人品有关了啊
|
S**********e
发帖数: 620 | 13 文章发表之后，他相当于已经耍了猴子卖了膏药的秘方，别人用了他的秘方做不出来膏
药，当然要找他了。除非只有他家的炉灶能修炼。
【在 t*********2 的大作中提到】
: 生物实验的本质就是个厨子，让厨子公开自己的秘方，确实优点勉为其难 ：）你得去
: 他饭店偷师啊。
|
p******n
发帖数: 55 | 14 区别是，你按照老施发表出来的protocol、construct就能重复出他的结果。可是等到
做新一个新的蛋白的时候，老施他们组就又冲到前面了，这就是独门绝技，不服不行。
我也经常听说他们组放出厥词是，结晶容易，功夫在前面的生化，需要一两年培养
sense。
不知道分子生物学是不是也需要sense，我不做基因编辑，反正常规的cloning按照套路
随便做。
【在 t*********2 的大作中提到】
: 生物实验需不需要高超技巧，施老师早有定论。
: “除了仪器的进步，在施一公看来，他们能领先竞争对手的主要原因是拥有极为成熟的
: 样品处理方法。“也就是说如何让蛋白质服服帖帖、性质稳定，成为适合结构解析的样
: 品”，他半开玩笑地说“这是我们的独门绝招，这个绝招即便写出来，别人不在我的实
: 验室做上一两年也很难理解或吃透，因为这是师傅带徒弟一点点积累起来的。””
: 即便写出来，别人也不一定能做。。。。
:
: 叉？
|
d******t
发帖数: 27 | 15 http://www.zhihu.com/question/46 ... mp;isappinstalled=0
韩自己回复搬运如下，他自己也承认图四有难度：槐北路 1
12楼今天 16:22
操作
我目前仍只有一个做实验的小团队，无法做好服务性工作，一天十几个个电话我都是重
复的以下内容：----所谓
高超的技巧，其实也很简单，细胞做好检测，不要有寄生菌污染，不要有支原体污染（
Ago系统对污染特别敏
感---特别是单转guide假阳性---我非常确定在没有污染的情况下，单转guid不会影响
GFP表达，假阴性也大多因为细胞污染，假阳性和假阴性我都遇到过，国内买的细胞我
就不吐槽了），转染用的质粒质量要好（可用30ngGFP转细胞，若是均一且效率高表明
质量好，强弱不均一则表明质量差，越不均一表明质量越差），guide磷酸化完全（没
有磷酸化不能load和切割---谢谢印证我的Fig2结果，至于怎么检测，自己跑个PAGE看
看---），特别的，对于Fig4，也是几乎惟一算是有难度的，就是控制转染时的细胞密
度和用血清控制细胞生长，时间稍长，毕竟NgAgo未经过系统的密码子优化---照着
online method上protocol for genome editing and T7E1做（小经验，PCR最好不要有
引物二聚体，如果引物二聚体多请重设引物；PCR产物直接回收最好不跑胶回收，可能
跟ago切24bp有关，设好对照！）---银染分辨率高，可以排除T7E1假阳性，能做出预期
条带后请用PCR产物去测序--------欢迎大家广泛使用此系统，并分享成功经验和失败
教训。附，addgen上的质粒，可
以直接用作基因组编辑。再次强调，不加NgAgo，就能抑制GFP，是假阳性，是细胞出问
题了（谢天谢地不但
我自己而且审稿人也有这个对照）出现假阳性的细胞切基因组就没戏了。对于Fig4，若
是不习惯做银染，也可
以直接做KI：doner 用GFPcoden+polyA signal，前后加几个保护性的碱基---从GFP-N1
扩出来连到T-vector上，再从此doner-Tvector上扩（防止GFP-N1污染的假阳性）出来
纯化，500-800ng共转（for each well of 24 well plate）。 |
