b***e
发帖数: 26 | 1 不是做这一行的，纯推理。韩的文章刚出来的时候这里说他不是创新，有法国人早做出
来嗜热菌Ago了，质疑他的原创程度。现在倒没有人说他原创性了，质疑他造假。
从原理上说韩只是找到一个室温下可以工作的Ago，如果NgAgo有问题，是不是嗜热菌
Ago也有问题？ |
d******t
发帖数: 27 | |
L*****t
发帖数: 56 | 3 1.argonaute这个东西的相关文献很多，应该是真的
2.韩的NgAgo在低温下有活性应该也是真的，目前大部分实验室可以重复到Fig.3c切GFP
质粒这一步
3.现在大家怀疑的是这东西究竟能不能切开染色体。因为NgAgo没有PAM序列，理论上无
法主动打开双链DNA。那么也就说明这个东西对转录不活跃的区域切割效率是很可疑的
。就算是转录活跃区域，在37度下形成负超螺旋然后切割的难度也很大，没有试验数据
支持很难让人相信这个现象确实存在。 |
n**********g
发帖数: 196 | |
j****n
发帖数: 3370 | 5 外行说一句
ttAgo可以切质粒 但不能切genome
还有就是ttAgo只能切dna其中一条链
当然都是高温下
ngAgo可以切genome 而且貌似要两条链都切了才能做genome editing吧？
【在 b***e 的大作中提到】
: 不是做这一行的，纯推理。韩的文章刚出来的时候这里说他不是创新，有法国人早做出
: 来嗜热菌Ago了，质疑他的原创程度。现在倒没有人说他原创性了，质疑他造假。
: 从原理上说韩只是找到一个室温下可以工作的Ago，如果NgAgo有问题，是不是嗜热菌
: Ago也有问题？
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n**********g
发帖数: 196 | 6 楼主的提问在于没有读原文章。
【在 j****n 的大作中提到】
: 外行说一句
: ttAgo可以切质粒 但不能切genome
: 还有就是ttAgo只能切dna其中一条链
: 当然都是高温下
: ngAgo可以切genome 而且貌似要两条链都切了才能做genome editing吧？
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Z***L
发帖数: 9 | 7 首先 我不觉得有很多人重复了fig3c，有的看到了gfp下降，但是并没有看到indel数据。
然后14年高温的ttAgo是不能切割线性质粒的，文章中称ttago的切割需要负超螺旋结构
，切割的产生需要dna结构的帮助，而这个切割基因组的切割活性并不能确认。
退一万步讲，ttAgo在高温下能产生给切割，并不是说NgAgo在37度下就一定能切割，反
过来，如果NgAgo没有切割活性，也不能证明ttAgo就也在高温下没有活性。。这是两个
物种的ago系统，这两个之前没有什么必然的逻辑联系。
最近的例子，张锋的cpf1系统，张锋鉴定了好多物种的cpf1，很多在体外都有切割活性
的，都是cpf1系统，但是在哺乳动物细胞内，只有两个cpf1系统能够有效切割基因组。 |
