c********6
发帖数: 693 | 1 Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing
specificity
作者
F Ann Ran, Patrick D Hsu, Chie-Yu Lin, Jonathan S Gootenberg, Silvana
Konermann, Alexandro E Trevino, David A Scott, Azusa Inoue, Shogo Matoba, Yi
Zhang, Feng Zhang
重复出来的也可以说说，我到现在都高度怀疑有人拿Cas9 wild type的数据冒充Cas9n
。 | V*****g
发帖数: 43 | 2 我成功过，不过是那种一直单细胞传代的干细胞，经典的干细胞adapted过后的
Subclone里成功了。 | c********6
发帖数: 693 | 3 你总共鉴定了多少个单克隆才成功的？ 我知道的一个马普实验室鉴定了2000个才成功
一个，而且还是仅仅在使用野生型Cas9的情况下。我自己鉴定了1000多个，野生型的
Cas9，没有
成功。 文章中高达十分之一的成功率是怎么得来的。https://www.nature.com/nprot/
journal/v8/n11/full/nprot.2013.143.html
另外，据Google Group上面的讨论，FEI ANN RAN 在Addgene上面所提供的PX459质粒居
然混有带有SNP的变种质粒，实验室的管理方面应该存在问题。
【在 V*****g 的大作中提到】
: 我成功过，不过是那种一直单细胞传代的干细胞，经典的干细胞adapted过后的
: Subclone里成功了。
| s******r
发帖数: 1245 | 4 用普通的cas9不就行了，别人表演了个花式技巧，你边上看看鼓鼓掌就好，自己上去非
要学就属于被人卖了还帮着数钱。
做genome editing用double nicking的都是闲的蛋疼，明明用个勺就能吃上饭，非要用
筷子，还他妈左右手各使一根
Yi
Cas9n
【在 c********6 的大作中提到】
: Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing
: specificity
: 作者
: F Ann Ran, Patrick D Hsu, Chie-Yu Lin, Jonathan S Gootenberg, Silvana
: Konermann, Alexandro E Trevino, David A Scott, Azusa Inoue, Shogo Matoba, Yi
: Zhang, Feng Zhang
: 重复出来的也可以说说，我到现在都高度怀疑有人拿Cas9 wild type的数据冒充Cas9n
: 。
| c********6
发帖数: 693 | 5 就算用普通的Cas9在人的干细胞都是效率极低的。
【在 s******r 的大作中提到】
: 用普通的cas9不就行了，别人表演了个花式技巧，你边上看看鼓鼓掌就好，自己上去非
: 要学就属于被人卖了还帮着数钱。
: 做genome editing用double nicking的都是闲的蛋疼，明明用个勺就能吃上饭，非要用
: 筷子，还他妈左右手各使一根
:
: Yi
: Cas9n
| c********6
发帖数: 693 | | c********6
发帖数: 693 | | c********6
发帖数: 693 | 8 查了很多文献，确实没有几篇文献重复出来，反而是用plasmid做donor的文章越来越多
Yi
Cas9n
【在 c********6 的大作中提到】
: Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing
: specificity
: 作者
: F Ann Ran, Patrick D Hsu, Chie-Yu Lin, Jonathan S Gootenberg, Silvana
: Konermann, Alexandro E Trevino, David A Scott, Azusa Inoue, Shogo Matoba, Yi
: Zhang, Feng Zhang
: 重复出来的也可以说说，我到现在都高度怀疑有人拿Cas9 wild type的数据冒充Cas9n
: 。
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