慢病毒transfer质粒上的各个元件问题 - Biology版

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Biology版 - 慢病毒transfer质粒上的各个元件问题

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m*****8
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一直在用一个慢病毒质粒，很好用，想在这个基础上修改下，但是今天看了图谱，有几
个问题不太明白，想请教下大家，我这个慢病毒transfer质粒上的元件顺序是这样的：
RSV Promoter-5’LTR（truncated）-HIV-1(φ)-RRE-cPPT/CTS-EF1a promoter-GFP-
SV40-5'LTR(truncated)-puromycin-WPRE-3'LTR(ΔU3)-SV40 polyA.
我想请教的问题是：
1. 这里有两个读码框，一个是表达GFP的，一个是表达Puro的，SV40 drive的puro的转
录终止可以由3'LTR调控，对吧？那么GFP在受到EF1a启动的转录如何终止呢？
2. 为什么会有两个5’LTR？我看了下序列，第一个5’LTR（RSV挨着的那个）和3'LTR
(ΔU3)序列是一样的， SV40之后那个5’LTR，用snapgene自动查询和NCBI blast，也
确实是个5’LTR序列，但是和另外一个5’LTR序列完全不一样，那这个SV40之后的5’
LTR有什么作用？
3. 为什么3'LTR(ΔU3)之后还有一个SV40 polyA？这个polyA的作用是什么？
谢谢！

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