h*********o 发帖数: 19006 | 1 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平(32P标记)。最后洗完Protei
n-A agarose后,加2 X SDS上样缓冲液,如果直接吸一是太粘吸不出来,另外这样的缓
冲液里也没蛋白信号(文献上说37度处理5 min,试过不行,难道beads用的不一样?)
。
如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来,但预实验表明100度
处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友,还有别的
什么着数可以用吗? |
k****r 发帖数: 9629 | 2 (37+100)/2=68 degree for 5 min.
Protei
别的
【在 h*********o 的大作中提到】 : 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平(32P标记)。最后洗完Protei : n-A agarose后,加2 X SDS上样缓冲液,如果直接吸一是太粘吸不出来,另外这样的缓 : 冲液里也没蛋白信号(文献上说37度处理5 min,试过不行,难道beads用的不一样?) : 。 : 如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来,但预实验表明100度 : 处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友,还有别的 : 什么着数可以用吗?
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P**********n 发帖数: 6311 | 3 最近 collaborator 用的是 depolymerase 和蛋白Y的 fret 来做的
因为这种 depolymerase 的效率很高,基本上有多少磷酸化了的Y就bind多少
Protei
别的
【在 h*********o 的大作中提到】 : 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平(32P标记)。最后洗完Protei : n-A agarose后,加2 X SDS上样缓冲液,如果直接吸一是太粘吸不出来,另外这样的缓 : 冲液里也没蛋白信号(文献上说37度处理5 min,试过不行,难道beads用的不一样?) : 。 : 如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来,但预实验表明100度 : 处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友,还有别的 : 什么着数可以用吗?
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h*********o 发帖数: 19006 | 4 这么神速,牛~。
话说这些问题不重要,到底还奔不奔啊
【在 k****r 的大作中提到】 : (37+100)/2=68 degree for 5 min. : : Protei : 别的
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h*********o 发帖数: 19006 | 5 谢谢啊,都有包子吃!嗯,替版主们说一下哈。这么热心帮助童鞋
【在 P**********n 的大作中提到】 : 最近 collaborator 用的是 depolymerase 和蛋白Y的 fret 来做的 : 因为这种 depolymerase 的效率很高,基本上有多少磷酸化了的Y就bind多少 : : Protei : 别的
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d**********u 发帖数: 4124 | 6 完全不懂:(
Protei
别的
【在 h*********o 的大作中提到】 : 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平(32P标记)。最后洗完Protei : n-A agarose后,加2 X SDS上样缓冲液,如果直接吸一是太粘吸不出来,另外这样的缓 : 冲液里也没蛋白信号(文献上说37度处理5 min,试过不行,难道beads用的不一样?) : 。 : 如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来,但预实验表明100度 : 处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友,还有别的 : 什么着数可以用吗?
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p*******y 发帖数: 18288 | 7 黑童鞋发彪了
Protei
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【在 h*********o 的大作中提到】 : 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平(32P标记)。最后洗完Protei : n-A agarose后,加2 X SDS上样缓冲液,如果直接吸一是太粘吸不出来,另外这样的缓 : 冲液里也没蛋白信号(文献上说37度处理5 min,试过不行,难道beads用的不一样?) : 。 : 如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来,但预实验表明100度 : 处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友,还有别的 : 什么着数可以用吗?
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h*********o 发帖数: 19006 | 8 嗯,飞镖,你小心。
【在 p*******y 的大作中提到】 : 黑童鞋发彪了 : : Protei : 别的
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