h*********o
发帖数: 19006 | 1 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平（32P标记）。最后洗完Protei
n-A agarose后，加2 X SDS上样缓冲液，如果直接吸一是太粘吸不出来，另外这样的缓
冲液里也没蛋白信号（文献上说37度处理5 min，试过不行，难道beads用的不一样？）
。
如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来，但预实验表明100度
处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友，还有别的
什么着数可以用吗？ |
k****r
发帖数: 9629 | 2 (37+100)/2=68 degree for 5 min.
Protei
别的
【在 h*********o 的大作中提到】
: 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平（32P标记）。最后洗完Protei
: n-A agarose后，加2 X SDS上样缓冲液，如果直接吸一是太粘吸不出来，另外这样的缓
: 冲液里也没蛋白信号（文献上说37度处理5 min，试过不行，难道beads用的不一样？）
: 。
: 如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来，但预实验表明100度
: 处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友，还有别的
: 什么着数可以用吗？
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P**********n
发帖数: 6311 | 3 最近 collaborator 用的是 depolymerase 和蛋白Ｙ的 fret 来做的
因为这种 depolymerase 的效率很高，基本上有多少磷酸化了的Ｙ就bind多少
Protei
别的
【在 h*********o 的大作中提到】
: 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平（32P标记）。最后洗完Protei
: n-A agarose后，加2 X SDS上样缓冲液，如果直接吸一是太粘吸不出来，另外这样的缓
: 冲液里也没蛋白信号（文献上说37度处理5 min，试过不行，难道beads用的不一样？）
: 。
: 如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来，但预实验表明100度
: 处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友，还有别的
: 什么着数可以用吗？
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h*********o
发帖数: 19006 | 4 这么神速，牛~。
话说这些问题不重要，到底还奔不奔啊
【在 k****r 的大作中提到】
: (37+100)/2=68 degree for 5 min.
:
: Protei
: 别的
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h*********o
发帖数: 19006 | 5 谢谢啊，都有包子吃！嗯，替版主们说一下哈。这么热心帮助童鞋
【在 P**********n 的大作中提到】
: 最近 collaborator 用的是 depolymerase 和蛋白Ｙ的 fret 来做的
: 因为这种 depolymerase 的效率很高，基本上有多少磷酸化了的Ｙ就bind多少
:
: Protei
: 别的
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d**********u
发帖数: 4124 | 6 完全不懂：（
Protei
别的
【在 h*********o 的大作中提到】
: 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平（32P标记）。最后洗完Protei
: n-A agarose后，加2 X SDS上样缓冲液，如果直接吸一是太粘吸不出来，另外这样的缓
: 冲液里也没蛋白信号（文献上说37度处理5 min，试过不行，难道beads用的不一样？）
: 。
: 如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来，但预实验表明100度
: 处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友，还有别的
: 什么着数可以用吗？
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p*******y
发帖数: 18288 | 7 黑童鞋发彪了
Protei
别的
【在 h*********o 的大作中提到】
: 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平（32P标记）。最后洗完Protei
: n-A agarose后，加2 X SDS上样缓冲液，如果直接吸一是太粘吸不出来，另外这样的缓
: 冲液里也没蛋白信号（文献上说37度处理5 min，试过不行，难道beads用的不一样？）
: 。
: 如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来，但预实验表明100度
: 处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友，还有别的
: 什么着数可以用吗？
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h*********o
发帖数: 19006 | 8 嗯，飞镖，你小心。
【在 p*******y 的大作中提到】
: 黑童鞋发彪了
:
: Protei
: 别的
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