j**i
发帖数: 89 | 1 酶无法提纯(目前)
所以只好测总蛋白浓度,
但是很难说不同的样品中,该酶的百分含量
是一样的,这样的情况怎么处理?
往往是测的总蛋白浓度差不多,
可是western blot出来的带的不一样,
有的浓些, 有的淡些,差别很大.
一般coding region的点突变应该不会对蛋白的表达有那么大的影响吧.
搞的结果很难解释. | w*****r
发帖数: 239 | 2
点突变表达的差异会很大的说，藕现在做的一个，表达的量只有wild type的
十分之一，很是不爽，要是你的蛋白或底物有颜色，粗品一样测浓度呀
【在 j**i 的大作中提到】
: 酶无法提纯(目前)
: 所以只好测总蛋白浓度,
: 但是很难说不同的样品中,该酶的百分含量
: 是一样的,这样的情况怎么处理?
: 往往是测的总蛋白浓度差不多,
: 可是western blot出来的带的不一样,
: 有的浓些, 有的淡些,差别很大.
: 一般coding region的点突变应该不会对蛋白的表达有那么大的影响吧.
: 搞的结果很难解释.
| j**i
发帖数: 89 | 3
你的点突变是不是在调节区域呀?怎么会有那么大的影响?
偶的蛋白是线粒体的膜蛋白,没有颜色,
偶每次就用线粒体直接测活性,
因为该酶脱离了膜就没有活性了.
这样一来我测的是总蛋白浓度,
我又不能确定酶在线粒体里的百分含量.
你说怎么办呀?
【在 w*****r 的大作中提到】
:
: 点突变表达的差异会很大的说，藕现在做的一个，表达的量只有wild type的
: 十分之一，很是不爽，要是你的蛋白或底物有颜色，粗品一样测浓度呀
| no
发帖数: 560 | 4 瞎整能出省！有多少实验室做带金属牙祭的蛋白压。
【在 w*****r 的大作中提到】
:
: 点突变表达的差异会很大的说，藕现在做的一个，表达的量只有wild type的
: 十分之一，很是不爽，要是你的蛋白或底物有颜色，粗品一样测浓度呀
| w*****r
发帖数: 239 | 5 灰说，藕们实验室就做这个，泥不来藕们这算乐，不要打击面太大嘛
【在 no 的大作中提到】
: 瞎整能出省！有多少实验室做带金属牙祭的蛋白压。
| w*****r
发帖数: 239 | 6 你知不知道纯没得活性呀？先测总酶活(在线粒体里)，然后取定量
测总蛋白浓度呀，用SDS就可以吧？我不太懂，仅做参考
【在 j**i 的大作中提到】
:
: 你的点突变是不是在调节区域呀?怎么会有那么大的影响?
: 偶的蛋白是线粒体的膜蛋白,没有颜色,
: 偶每次就用线粒体直接测活性,
: 因为该酶脱离了膜就没有活性了.
: 这样一来我测的是总蛋白浓度,
: 我又不能确定酶在线粒体里的百分含量.
: 你说怎么办呀?
| j**i
发帖数: 89 | 7
我问的就是测总蛋白浓度呀,
福林酚法,不准.
【在 w*****r 的大作中提到】
: 你知不知道纯没得活性呀？先测总酶活(在线粒体里)，然后取定量
: 测总蛋白浓度呀，用SDS就可以吧？我不太懂，仅做参考
| w*****r
发帖数: 239 | 8 藕不是说了么，你测完酶活以后，用SDS八线粒体处理一下，让蛋白都
放出来，用我前面说的那种染液，测吸光度，这个你要先
用其他蛋白做一个标准曲线才好对照，你如果需要，我去看看
染液的牌子
【在 j**i 的大作中提到】
:
: 我问的就是测总蛋白浓度呀,
: 福林酚法,不准.
| j**i
发帖数: 89 | 9
你说的有道理,
福林酚法也是加SDS的,
你先告诉我牌子吧,
我找找看看.
【在 w*****r 的大作中提到】
: 藕不是说了么，你测完酶活以后，用SDS八线粒体处理一下，让蛋白都
: 放出来，用我前面说的那种染液，测吸光度，这个你要先
: 用其他蛋白做一个标准曲线才好对照，你如果需要，我去看看
: 染液的牌子
| p**h
发帖数: 99 | 10
you must be careful on this point.
site mutations may affect (4 example: preenzyme's) expression.
【在 j**i 的大作中提到】
: 酶无法提纯(目前)
: 所以只好测总蛋白浓度,
: 但是很难说不同的样品中,该酶的百分含量
: 是一样的,这样的情况怎么处理?
: 往往是测的总蛋白浓度差不多,
: 可是western blot出来的带的不一样,
: 有的浓些, 有的淡些,差别很大.
: 一般coding region的点突变应该不会对蛋白的表达有那么大的影响吧.
: 搞的结果很难解释.
| w*****r
发帖数: 239 | 11 GELCODE blue stain reagent
【在 j**i 的大作中提到】
:
: 你说的有道理,
: 福林酚法也是加SDS的,
: 你先告诉我牌子吧,
: 我找找看看.
| w*****r
发帖数: 239 | 12 pierce
【在 j**i 的大作中提到】
:
: 你说的有道理,
: 福林酚法也是加SDS的,
: 你先告诉我牌子吧,
: 我找找看看.
| j**i
发帖数: 89 | 13
跟BCA kit 一个厂的.
【在 w*****r 的大作中提到】
: pierce
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