g***s
发帖数: 60 | 1 我知道一般的tris, hepes什么的，buffer pH,
Detergent可以溶解细胞膜，看大家常用1%NP-40或者1%Triton x-100，
这个1%是怎么确定的，经验？
还有各种盐，多数时候是NaCl，但是nuclear extract经常用KCl，这是为什么呢？
也常常加Mg，不过Mg不是protease需要的吗，会不会导致蛋白降解？更疑惑的是
还有同时加Mg和EDTA的，EDTA不是chelate二价离子吗，这样的话不是互相取消了吗。 | e****s
发帖数: 1125 | 2 IP buffer倒是没见过Mg和EDTA一起加的！
EDTA通常是防止蛋白在lyaste里面磷酸化的。Mg很少加在IP buffer吧？！
NaCl KCl应该区别不大？ 没做过nuclear extract。
【在 g***s 的大作中提到】
: 我知道一般的tris, hepes什么的，buffer pH,
: Detergent可以溶解细胞膜，看大家常用1%NP-40或者1%Triton x-100，
: 这个1%是怎么确定的，经验？
: 还有各种盐，多数时候是NaCl，但是nuclear extract经常用KCl，这是为什么呢？
: 也常常加Mg，不过Mg不是protease需要的吗，会不会导致蛋白降解？更疑惑的是
: 还有同时加Mg和EDTA的，EDTA不是chelate二价离子吗，这样的话不是互相取消了吗。
| g********4
发帖数: 4959 | 3 你这是怎么看帖的？人家问的是general的问题，对多数buffer说的，到你这里便变成
了IP buffer了。EDTA的作用，你的回答还没原帖理解的好呢！
希望看到好的回答。
我现在的一个实验因为看到锌离子的增强作用，因此把EDTA从buffer里减了，但
protease和RNase（nuclease）明显增强，RNA-binding activity都没法分析了。
发信人: emases (sesame), 信区: Biology
标 题: Re: 请教buffer里的各种成分作用
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 28 17:23:06 2010, 美东)
IP buffer倒是没见过Mg和EDTA一起加的！
EDTA通常是防止蛋白在lyaste里面磷酸化的。Mg很少加在IP buffer吧？！
NaCl KCl应该区别不大？ 没做过nuclear extract。 | g***s
发帖数: 60 | 4 谢谢两位，
希望有更多的专家看看这个小问题。
你这是怎么看帖的？人家问的是general的问题，对多数buffer说的，到你这里便变成
了IP buffer了。EDTA的作用，你的回答还没原帖理解的好呢！
希望看到好的回答。
我现在的一个实验因为看到锌离子的增强作用，因此把EDTA从buffer里减了，但
protease和RNase（nuclease）明显增强，RNA-binding activity都没法分析了。
发信人: emases (sesame), 信区: Biology
标 题: Re: 请教buffer里的各种成分作用
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 28 17:23:06 2010, 美东)
IP buffer倒是没见过Mg和EDTA一起加的！
EDTA通常是防止蛋白在lyaste里面磷酸化的。Mg很少加在IP buffer吧？！
NaCl KCl应该区别不大？ 没做过nuclear extract。
【在 g********4 的大作中提到】
: 你这是怎么看帖的？人家问的是general的问题，对多数buffer说的，到你这里便变成
: 了IP buffer了。EDTA的作用，你的回答还没原帖理解的好呢！
: 希望看到好的回答。
: 我现在的一个实验因为看到锌离子的增强作用，因此把EDTA从buffer里减了，但
: protease和RNase（nuclease）明显增强，RNA-binding activity都没法分析了。
: 发信人: emases (sesame), 信区: Biology
: 标 题: Re: 请教buffer里的各种成分作用
: 发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 28 17:23:06 2010, 美东)
: IP buffer倒是没见过Mg和EDTA一起加的！
: EDTA通常是防止蛋白在lyaste里面磷酸化的。Mg很少加在IP buffer吧？！
| w***e
发帖数: 269 | 5 最常见的各种盐的浓度是模拟体内的环境使细胞的渗透压in vitro和in vivo的环境差
不多.一般的Na+,K+, Cl-, Mg2+,PO43-盐都是这个用途.比如说一般含Na+的bufferNa+
的浓度都在150mM左右,就是因为体内细胞外(血液组织液等)的Na浓度是150mM. K+离子细胞外是３-４mM, 细胞内大概是120mM. 比如最常用的ＰＢＳ,Ｎa+大概150mM,K+大概４.５ｍＭ.我猜这就是为什么nuclear extraction中Ｋ的浓度高,因为要模拟细胞内的离子组成.当然特殊的盐的用途就是case by case. |
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