z*******6
发帖数: 679 | 1 我道听途说到monocyte可以在DMEM+10%FBS中存活至少一周，可是貌似找不到相关文献
（小弟比较刚入行没多久）。。。我觉得可以通过这种方法分开monocyte和macrophage
，因为在不加任何cytokine的情况下，macrophage马上就死。。。
请问这种方法可行吗？大家有什么培养mouse monocyte的经验啊？monocyte是会贴壁的
吧？ |
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e**r
发帖数: 1144 | 2 CHO K1细胞，前一天用150uM H2O2处理过，养了一天，大部分细胞漂起来了，剩下贴壁
的细胞在相差显微镜下看大部分都有两团亮的东西在核的两侧
之前也看到过一次这种东西，那次是因为在DMEM里养了几天，大概是因为没有proline,
所有细胞都变成了这个样子。换成F12养了一天就恢复正常形态了。
谁知道这种亮的东西是什么结构？ 低倍用眼睛看似乎是一些小泡构成的簇
Hela, 293T上没见过这种东西。 |
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a*****x
发帖数: 901 | 3 贴壁慢慢加。或者用Multidrop 或者 wellmate之类的机器加，不贵的。
边上的信号觉得不是cell,可能是荧光折射的原因。可以在空盘中直接加些不同浓度的
荧光染料溶液看看。 quantify用中间的信号就行了。 |
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c**a
发帖数: 94 | 4 384的盘子用CHO做ICW, 种细胞之后和第二天早上都好好的, 到了做serum starve 之后
一看好多细胞被洗掉了,但是奇怪的是正中间的不掉,贴壁一圈不掉,而是周边的细胞都
没了, western染色之后看起来像个'回'字. 具体样子在附件里. 我确定的一点是之后
的treatment 和western步骤并没有显著的让细胞减少, 所以貌似问题在用plain
medium 洗细胞和serum starvation步骤上. 是这样的吗, 怎么避免呢, 洗的时候很
gentle了, 怎么可以更gentle呢? |
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l*******c
发帖数: 478 | 5 请问：293细胞是T细胞的一种吗？是悬浮生长还是贴壁的？
谢谢！ |
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s*********t
发帖数: 600 | 6 不是。是人胚胎肾脏未成熟神经细胞永生化的细胞系。贴壁 |
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e**r
发帖数: 1144 | 9 hela
lipo转染后12小时看还是好的
用培养基换掉后又过了12小时，发现大部分细胞都死了，死掉的细胞大部分仍然贴壁保
持梭形，部分漂起来的也是扁平梭形的 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 10 只有吸,没有吹.
我做细胞的(贴壁或悬浮生长的).我旁边实验室做组织切片.我还是从他们那里得到的启
示,用笔隔绝,然后反复洗/吸.
当然,最后一步洗可以整个载片泡在PBS里,其他没有任何问题. |
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s******y
发帖数: 28562 | 11 哦。这么说其实就是一个不贴壁而且特别难侍候的细胞啊 |
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o***e
发帖数: 12 | 12 好养倒是真的。当然贴壁后就容易分化。转染的话，电转和病毒都可以吧。 |
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t****t
发帖数: 86 | 13 如果不想让它们分化，是不是一定要在ultra low attachment plate里培养？
我一把它们转到普通培养皿里他们就贴壁，不像文献里说的会形成neurosphere。
先谢过了！ |
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m******n
发帖数: 121 | 14 我们是用polyheme coat flask养sphere，然后就不怎么贴壁了。虽然我一直不知道具
体机制。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 15 这个很正常，不用担心，
左边的细胞太密了，大部分细胞都被顶起来了，所以成像质量很糟糕。
另外，actin 在组织细胞里面看起来就是和你左边的那个图差不多的，
右边那个里面大部分都是所谓的stress fiber, 是fibroblast这类的贴壁细胞
在培养情况下充分展开后的特定条件下的表型，反而不是正常的组织细胞应该
有的样子。
Bearbaby 说的是对的。 但是你可能是开始接触细胞的人，她说的对于你而言
可能有点太深 ：） |
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v***a
发帖数: 1242 | 16 hi sunnyday 非常感谢你的详尽回答！
是的，左边的怎么拍都丑。你能再解释一下为什么顶起来的细胞就会造成成像质量差呢？
我养的是一样的贴壁细胞……左边的情况是第一次见到。。 |
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b******s
发帖数: 5365 | 17 可以，但要很小心操作，特别是容易结团的细胞比如hepG2什么的，另外同时染个PI |
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h*******o
发帖数: 4884 | 19 记得以前在这个板上看说可以用个什么试剂coat一下， 现在找不到那个帖子了
麻烦知道的大侠再告诉一声
谢谢！！ |
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m*******m
发帖数: 442 | 22 Ultra-low binding plates. |
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v*********d
发帖数: 382 | 25 Corning Ultra Low attachment
挺贵的，但是可以反复用， 绝对值！ 而且，他们现在在做推广，送样品 |
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s****l
发帖数: 395 | 26 今年参观了一次，最牛x的地方是养贴壁的细胞已经不用人工了，全部机器化编程培养 |
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v***a
发帖数: 1242 | 27 是用来做贴壁细胞的荧光染色的。以前只用过4%多聚甲醛以及甲醇，分别在室温和-20
度下固定，时间最多20分钟。这次因为时间来不及，就想固定过夜。不知道可以吗？是
都放在4度过夜呢，还是也要分室温和-20度的说？谢谢有经验人的分享。 |
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v***a
发帖数: 1242 | 28 是用来做贴壁细胞的荧光染色的。以前只用过4%多聚甲醛以及甲醇，分别在室温和-20
度下固定，时间最多20分钟。这次因为时间来不及，就想固定过夜。不知道可以吗？是
都放在4度过夜呢，还是也要分室温和-20度的说？谢谢有经验人的分享。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 32
轻微晃动不会掉，可能经不住5次洗涤啊。谢谢！ |
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r***e
发帖数: 2539 | 34 cyto-spin?
or spin the whole plate with cells.
一般做免疫荧光都没问题，比如Jurkat cell。
就是不知道你准备怎么洗。 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 36 这个是Control well的，就是只是change 了media.
--那你的treat换了没有?
我一般是提前一天把细胞设置好,第二天一早加药treat.根本不换media了.不过我的多
是悬浮细胞.
有可能换MEDIA把贴壁细胞给冲悬浮了? |
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y********g
发帖数: 782 | 37 Treat的细胞也是这样子的，好像细胞“漏”了似的~~~
细胞悬浮了会是这样子的吗？悬浮细胞一般都是圆的吧，我的看起来好像还贴壁。
用同一个incubator的女生的细胞没有问题，我Flask里面传代的细胞也没有问题。哎，
纠结死了。。 |
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w********r
发帖数: 1431 | 38 我们用PDL coate plate
效果不错 |
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C**S
发帖数: 522 | 40 刚好也要用这个细胞，问一下大家都用什么方法做plasmid transfection？ |
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w********r
发帖数: 1431 | 41 PEI,便宜量又足。
两三百美刀可以配2L,能用到地老天荒了 |
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k***e
发帖数: 41 | 42 calcium phosphate.
请问二楼， PDL是？ |
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i*********0
发帖数: 915 | 44 我前一段时间也在用这个phenix细胞，但是没有lz说的飘的情况。我passage这个细胞
一般都是用medium去吹的，不用胰酶消化。 |
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B*N
发帖数: 455 | 45 一个成年心肌细胞长约100-140Um，厚约20-25um,在体内的时候，收缩时长度变短约40%
。厚度增加约30%，成年心肌细胞在体外一般跳动用药物抑制住，不跳，挑跳的细胞不
贴壁很快死掉。也有人做单细胞动力学，跳动的幅度一般比体内小 |
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f*******d
发帖数: 92 | 46 的确，这个细胞不是很容易贴壁。而且非常容易浮起来。你可以试着用collegen
coated的板子。 |
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k**********y
发帖数: 3 | 47 我PhD时候的老板，就直接把在培养皿里贴壁生长的细胞带上飞机的。。。就是一个T25
，灌满培养基，也不到100ml，细胞嘛就在里面长着，然后他说安检的人什么也没有问
就让他过了，我当时看到他那样拿来的细胞都惊讶的不得了。。。不过那个是短途飞行
，要是回国的话，嗯，还是有点挑战的吧，得看你的细胞是不是娇贵啦。 |
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c*****y
发帖数: 35 | 48 自己或托朋友带细胞回国，近两年共6次，都是SFO-PEK， 贴壁细胞于50ml flask灌满
media3次，冻存细胞于干冰foam box中托运行李箱3次，均顺利抵达，没有受到任何海
关检查。至少8今年8月还没问题。其他机场没试过，不敢保证，但认为值得尝试。 |
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k******y
发帖数: 236 | 49 在贴壁细胞中siRNA了某基因，之后就有大量的碎片漂浮在medium里，镜下看就是小圆
泡，diameter < 10um，而细胞即使trypsin消化下来之后也并不是规则的圆形，这些碎
片并不能uptake trypan blue，计数活细胞(trypan blue-, diameter > 10um) 的数量
有明显减少, 但以trypan blue+ 的％算，并不比对照组减少很多，大概从95％减少到
90％
用FITC-Annexin V和PI double staining，做flow没有看到明显Annexin V+细胞群，
AnnexinV+ PI+细胞群会增加但也不会增加太多(本身％也小于10％)
用50uM Z-VAD-FMK caspase inhibitor 与siRNA共同处理细胞, 这些碎片就不会产生，
计数活细胞的数量也不会减少, 和对照细胞没有差别
请问这是否说明细胞有死亡？能否看出是何种死亡方式？谢谢大家! |
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