i***a 发帖数: 11095 | 1 n多年前做过,应该挺简单的
若是30bp的话
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如上图一样设计引物,中间15-20个碱基配对,两端再加上6个碱基的内切酶位点,再各
加3-4个保护碱基
正常PCR后,电泳,纯化,测浓度,各自酶切,失活,酒精沉淀,再溶,然后用T4连接酶连接
clony PCR的时候可以用primer之一跟vector上附近的一个primer试试看 |
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b*****t 发帖数: 9671 | 2 路透上海2月9日电---中国大型投行--中金公司发布报告认为,央行本次加息的时间早于
预期,而二季度居民消费价格指数(CPI)同比还有可能再创新高,因此未来还可能有1-2次
加息,但一年期定存利率年内超过3.5%的可能性不大.
中金公司指出,CPI创新高或许是触发央行再次加息以达到控制通胀预期的效果,但更重
要的是,这可能反映了央行对未来中长期的通胀水平并不乐观,尤其是受季节和天气等短
期因素影响较小的非食品价格近期呈现出加速上涨的趋势,对核心通胀的中枢将起到推
高的作用.
而法定存款准备金比率持续上调对流动性的影响超出央行的预期,通过加息有助于提高
央票利率,使公开市场操作能够在一定程度上有所恢复,减轻法定比率的上调压力.
中国央行周二晚间宣布,自2月9日起,金融机构一年期存款利率将上调25个基点至3.0%,
一年期贷款利率将上调25个基点至6.06%.
报告称,一年期存款利率升至3%是比较确定的,对央行而言也是相对容易决策的,因为这
样的一个利率水平只能算是中性,而不是偏紧;但如果基准利率要继续上调,央行会更加
谨慎,今年大幅加息的可能性不大.
此外五年期存款利率水平已经达到了5%... 阅读全帖 |
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a*****a 发帖数: 32 | 3 一条30bp,一条40bp, 中间30bp为互补序列,Tm76度 |
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a*****a 发帖数: 32 | 4 谢谢大家的指点,根据楼上各位的办法我都试了试,都挺好用的。非常感谢!
发信人: wangbin (wangbin), 信区: Biology
应该挺简单的,照这个配下buffer https://products.appliedbiosystems.com/ab/en/
US/adirect/ab?cmd=catNavigate2&catID=603425 sample 95度3-5分钟,不用30分钟,
那是给大片段用的,200以下SSR之类的5分钟就够了,时间太长了引起降解(大片段掉俩bp看不
出来),确实会出N条带,冰上放一会儿(把泳道吹干净了),尥蹶子跑吧.然后染色,切胶回收,
(一条30bp,一条40bp是很大的差异了,一般差2bp就可以保证质量了)。
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发信人: ThisjobIwant (这活我来干), 信区: Biology
可以用PCR仪来加热,但是不应该用PCR仪来冷却。那个降温速度太慢了,还是会有部分
双链anneal上的。而且30分钟太... 阅读全帖 |
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a****d 发帖数: 1919 | 5 Two step PCR should work for your propose.
synthesize two pair of primers:
F1-xxxx
30bp-xxxx-R1
F2-xxx-30bp
xxxx-R2
PCR separately, then put together both products as template, PCR again using
F1-xxxx and xxx-R2. The final PCR product could be subcloned into the
plasmid. You have to find the suitable digestion sites when designing
primers though. |
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z*m 发帖数: 3227 | 6 根据7月2日的发行公告,山东省地方债的七家主承销商分别是工农中建交、广发银行和
北京银行。但最终中标利率低于国债20个基点的罕见结果,导致主承销商中竟然有两家
都未能中标。
"收益率低,肯定是因为想买的人多,买地方债就是支持地方经济发展,很明显是银行
热捧。"一位券商人士对《财经国家周刊》记者表示,目前对债券利率影响最大的是市
场供需关系和资金面情况,针对地方自行发债而言,一般发债前政府都会和银行沟通,
"但可能山东政府用力过猛了,没想到银行出价过低,导致无序竞争。
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8月11日,宁夏5年、7年、10年期自发自还地方债中标利率分别为3.98%、4.17%、4.26%。
这是继5月财政部印发《2014年地方政府债券自发自还试点办法》并批准10家地方政府
试点后,已经完成发行的第五个地方。
不过,不论是经济较发达的沿海省份广东、山东、江苏,还是内陆相对欠发达的江西、
宁夏,中标利率均与享有国家信用的国债发行利率相差无几,山东省地方债甚至低于国
债利率20个基点,而且均获得AAA的最高评级,难以凸显各省之间的风险差别定价。
对此,财... 阅读全帖 |
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s********n 发帖数: 26222 | 7 农行票据窝案38亿无法兑付 公安部银监会上报国务院
2016年01月22日08:15 新浪财经 1.8万
新浪财经讯 1月22日消息,据财新网报道称,农行北京分行2名员工已被立案调查
,原因是涉嫌非法套取38亿元票据,同时利用非法套取的票据进行回购资金,且未建立
台账,回购款其中相当部分资金违规流入股市,而由于股价下跌,出现巨额资金缺口无
法兑付。由于涉及金额巨大,公安部和银监会已将该案件上报国务院。
据报道,案件的大致脉络是,农行北分与某银行进行一笔银行承兑汇票转贴现业务
,在回购到期前,银本票应存放在农行北分的保险柜里,不得转出。但实际情况是,银
本票在回购到期前,就被某重庆票据中介提前取出,与另外一家银行进行了回购贴现交
易,而资金并未回到农行北分的账上,而是非法进入了股市。“农行北分保险柜中原来
封包入库保存的票据则被换成报纸。”一位接近农行北分的人士对此证实。
去年5月,农行北京分行副行长陈英顺因违规代销某理财产品(即“飞单”)被免
职。
21世纪经济报道1月21日未点名报道了某国有大行巨额票据案件。报道称,该案件
在票据市场迅速蔓延,一定程度上影响票据贴现利率出现大幅反弹。... 阅读全帖 |
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n******g 发帖数: 17225 | 8 央行主管媒体谈美国经济:已有过热现象 预计短升长降
美国经济是否过热?
来源:金融时报
李赫
近期,美国公布的二季度宏观数据依旧强劲,GDP增速为4.1%,是2011年之后的最
高水平。失业率3.8%,创18年来最低。受强劲宏观数据影响,美联储9月份加息的概率
加大,美元指数可能进一步提升,外溢效应导致新兴市场国家风险加大。后期美国经济
是一路向上还是已经到了强弩之末,成为市场关注的热点。
从利率看,经济隐忧开始显现。目前美联储采取稳定物价和就业最大化的双重货币
政策,是通过调整利率来实现的。从泰勒规则看,加息趋势仍将持续。泰勒规则是美国
常用的货币政策规则之一,伯南克和耶伦都曾根据泰勒规则来调整短期利率。2018年二
季度的泰勒规则利率已高于实际利率并且有持续向上的趋势,实际利率二季度是1.74%
,泰勒规则利率已达2.13%,说明未来短期还有上升的可能,利率上升不利于美国经济
的持续发展。美债期限利差已加速收窄。历史上看,每一次长端利率低于短端利率,也
就是收益率曲线倒挂时,都预示着美国经济衰退,甚至金融危机。目前来看,收益率曲
线斜率下降,美债期限利差(10Y-2Y)已不足30b... 阅读全帖 |
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K**W 发帖数: 6346 | 9 中美利率首次倒挂 利空人民币但并不是致命的影响
2018年08月07日 11:07 新浪财经
老实说,现在中美利差的不断走低,对人民币汇率确实是一大利空,但是并不见得就是
致命的影响。如下图,利差与人民币汇率间的走势多数情况下是截然相关的:利差扩大
,人民币贬值;利差缩小,人民币升值。
4月底至今,美元指数(95.1712, -0.2090, -0.22%)低位反弹,7月份涨至95.65,人民
币(6.8308, -0.0227, -0.33%)则应声大跌,4月底以来跌幅超6000点,8月3日就在人民
币兑美元汇率大幅逼近6.9关口之际,央行突然宣布将远期外汇风险准备金从0上调至20
%,人民币汇率瞬间暴涨超500点。
然而就在央行出手稳汇率的当下,汇率市场又传来大消息,根据“中金固收”一篇
《冰与火之歌》的报告:目前短端利率下行速度之快,使得中美利差在短端已经基本接
近0的状态。比如美国的3个月国债收益率已经上升到2%的水平,而中国3个月国债收益
率目前只有2.1%,两者只有不到10bp的利差,1年期美国国债收益率2.43%,与中国同期
期限国债的利差也只有不到30bp。7月底以来,... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 10 美联储(FED)加息虽然符合预期,但全球市场依然一片哀嚎。本已风声鹤唳的中国银
行间债券市场早盘加速崩跌,现券收益率和利率互换(IRS)全线飙涨,国债期货亦一
度跌停。近期银行间市场流动性问题以及经济基本面渐显暖意,极度脆弱的市场情绪在
美联储加息后集中爆发。
业内人士并分析称,美联储加息只是整个链条上的因素之一,导致市场剧烈反应的源头
依然在于国内去杠杆以及后续货币基金遭遇赎回而造成的市场踩踏;短期来看,央行虽
维稳姿态未改,但受内外因素的约束,政策进一步宽松的概率不大,债市调整趋势依旧。
“造成债市反应较大更主要的还是整个债券市场近期流动性问题,去杠杆,以及监管持
续收紧影响的不断发酵,绝不仅仅是美国加息的事。”南京证券固定收益分析师杨浩称。
他并指出,对于美国加息市场已充分反映,唯一超预期的可能就是明年的加息次数,主
要还是国内债券市场的情绪非常得低迷,只见利空不见利好,其实今天公开市场净投放
规模不算小。
中国央行公开市场今日进行总额2,450亿元人民币的逆回购操作,据此计算,单日净投
放1,450亿元。据路透统计,本周公开市场共有5,900亿元逆回购到期。
另有业内人士透露,... 阅读全帖 |
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l**********t 发帖数: 5754 | 11 that fund has a daily return std of 30bps, so a 55bp loss in a day is quite
possible.you may lose more than 1% in a day if the interest rate goes up
significantly in a day.
Given that current interest rate is at/near historical low, the fund has
more downside than upside. Unless you are a senior citizen, I hope you don't
have all your investment in bond fund. |
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s*****e 发帖数: 12 | 12 "
With xxxK shares, this would constitute 30bps (0.50%) of the company on a
fully diluted basis.
With xxxK shares, this would constitute 20bps (0.35%) of the company on a
fully diluted basis.
With xxxK shares, this would constitute 25bps (0.25%) of the company on a
fully diluted basis.
"
“We are currently in negotiations with our lead for the Series B. We have
finalized valuation and the amount to be raised, but we have not yet singed
off on all the details - so I don't know what the share price... 阅读全帖 |
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m*********a 发帖数: 3299 | 13 cmo 57% 是<6 month aged float agency bond, 价格不受利率影响。
43%是特殊的42 month reset float agency bond,价格受利率影响但是不大。因为他们
已经hedge 30 months的利息,利息duration只有一年。
如果利息上升100个百分点,他们的book value下降1%*1(duration)*43%*9=3.8%.
最能影响到他的是OAS(利息差 mortage-10 year treasury)。这个季度,这个变化几乎
没有,我的数据是-10bps对于5/1ARM,所以对他的利好。这个季度,利息上涨了30bps,
对他产生-1.2%book value。总的来说这个季度,他的book value应该不变或有增长。
我没有考虑prepayment 变化的情况下。 |
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a*****s 发帖数: 3643 | 14 现在还能投资AGNC一类否认mREIT吗/
30bps, |
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s********r 发帖数: 2067 | 15 牛人啊!
包子膜拜一下。
哪里能看到这么详细的信息?morningstar上面貌似没有。
我主要是垂涎于REIT的高分红,结果在AGNC上损失不少。
因为未来几年利率会保持上升,所以希望能够找到一只对利率变化不太敏感的REIT,高
人能推荐一下么?
有人推荐NCT,大虾以为如何?
拜谢赐教!
30bps, |
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a**********2 发帖数: 355 | 16 Americas : Market Intelligence – Morning Update
微信公众平台 USOPTIONS
by Chris Hussey
Published April 1, 2014
Stocks in Asia traded Tuesday with a slight positive bias as China's
official March PMI Manufacturing survey came in a touch better than expected
(50.3 vs 50.1 consensus). Japan's Nikkei index was the notable
underperformer as the country implements a 300bp higher sales tax today and
the February Monthly Labor Survey showed a disappointing 30bp decline in
wages - this despite concerted eff... 阅读全帖 |
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z*m 发帖数: 3227 | 17 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: zlm (We will prevail), 信区: Military
标 题: 神奇的国度:地方债利率低于国债竟遭热捧
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Aug 24 00:18:18 2014, 美东)
根据7月2日的发行公告,山东省地方债的七家主承销商分别是工农中建交、广发银行和
北京银行。但最终中标利率低于国债20个基点的罕见结果,导致主承销商中竟然有两家
都未能中标。
"收益率低,肯定是因为想买的人多,买地方债就是支持地方经济发展,很明显是银行
热捧。"一位券商人士对《财经国家周刊》记者表示,目前对债券利率影响最大的是市
场供需关系和资金面情况,针对地方自行发债而言,一般发债前政府都会和银行沟通,
"但可能山东政府用力过猛了,没想到银行出价过低,导致无序竞争。
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8月11日,宁夏5年、7年、10年期自发自还地方债中标利率分别为3.98%、4.17%、4.26%。
这是继5月财政部印发《2014年地方政府债券自发自还试点办法》并批准10家地方政府
试点... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 20 由于Teva解决了短期债务问题,我们建议暂时关仓旁观。Teva准备发行5b的债务,并更
改了covenant,用了我们提到的第一种和第三种方法。这里成功更改covenant,增加了
30bps左右的利息成本,并得到94%债权人支持在我们意料之外,显示市场短期对Teva的
计划比较自信。我们对常用药和Teva目前的市场状况仍然较悲观,所以会等待更好的时
机重新卖空,有兴趣的朋友可以关注我们公众号。多谢。 |
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t******g 发帖数: 4044 | 21 没这么多。一般bond mutual fund duration也就三到五。利率破三也就再涨30bp,也
就跌2%最多了。再加上一年还有2%利息。常常还能吃个rolling curve的carry。也就是
一年打平吧。 |
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z*m 发帖数: 3227 | 22 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: nengneng (能能), 信区: Military
标 题: 央行主管媒体:美经济已有过热现象
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Aug 3 03:07:15 2018, 美东)
央行主管媒体谈美国经济:已有过热现象 预计短升长降
美国经济是否过热?
来源:金融时报
李赫
近期,美国公布的二季度宏观数据依旧强劲,GDP增速为4.1%,是2011年之后的最
高水平。失业率3.8%,创18年来最低。受强劲宏观数据影响,美联储9月份加息的概率
加大,美元指数可能进一步提升,外溢效应导致新兴市场国家风险加大。后期美国经济
是一路向上还是已经到了强弩之末,成为市场关注的热点。
从利率看,经济隐忧开始显现。目前美联储采取稳定物价和就业最大化的双重货币
政策,是通过调整利率来实现的。从泰勒规则看,加息趋势仍将持续。泰勒规则是美国
常用的货币政策规则之一,伯南克和耶伦都曾根据泰勒规则来调整短期利率。2018年二
季度的泰勒规则利率已高于实际利率并且有持续向上的趋势,实际利率二季度是1.74%
,泰勒规则利率已达2.13%,说明未... 阅读全帖 |
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s*****e 发帖数: 12 | 23 【 以下文字转载自 JobHunting 讨论区 】
发信人: shawrie (shawrie), 信区: JobHunting
标 题: 这个股票如何理解?
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Aug 22 14:46:51 2014, 美东)
"
With xxxK shares, this would constitute 30bps (0.50%) of the company on a
fully diluted basis.
With xxxK shares, this would constitute 20bps (0.35%) of the company on a
fully diluted basis.
With xxxK shares, this would constitute 25bps (0.25%) of the company on a
fully diluted basis.
"
“We are currently in negotiations with our lead for the Series B. We have
finalized... 阅读全帖 |
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s*****e 发帖数: 12 | 24 【 以下文字转载自 Working 讨论区 】
发信人: shawrie (shawrie), 信区: Working
标 题: 这个股票如何理解? (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Aug 22 14:47:10 2014, 美东)
发信人: shawrie (shawrie), 信区: JobHunting
标 题: 这个股票如何理解?
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Aug 22 14:46:51 2014, 美东)
"
With xxxK shares, this would constitute 30bps (0.50%) of the company on a
fully diluted basis.
With xxxK shares, this would constitute 20bps (0.35%) of the company on a
fully diluted basis.
With xxxK shares, this would constitute 25bps (0.25%) of the company on a
fully ... 阅读全帖 |
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s*******e 发帖数: 740 | 25 If you clone a 30 bp DNA into the 5' of the filamentus phage
gene III or VIII, it will express a 10 Aa peptide on the surface
of the phage partical. So if you have a libray of random sequence
30bp DNA, you're able to get a libray of phage with each of
them express a different random 10 Aa peptide on the surface.
That is a 10Aa phage display library.
If you have a ligand and you're able to immoblize it on the coloumn,
you can screen the libray to see which of them bind.Sequence the binding
phage |
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c*******n 发帖数: 27 | 26 IMHP, for overlapping PCR, 10bp overlop is too short. Previous I tried
around 30bp overlap, it's ok, but sometimes takes a while. Then I always use
~50bp overlap, it always works with one or two tries. If your PCR not
working very good, try gradient PCR to find the best conditions.
You also can do it another way. After PCR, first try TA cloning, after
sequencing, cut it out and clone into your destiny plasmid. It always works
for me if having trouble cloning it directly into the destiny plasmid. |
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c*********r 发帖数: 1046 | 27 两端加上酶切位点,最多长20bp, PCR 产物在50bp左右,这么小的片段好连接吗?
还有其他方法吗? 谢谢! |
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b******k 发帖数: 1874 | 28 好像直接合成oligo,然后anneal,再链接就行。不过我也没有具体干过。我看的文章也
没有具体说怎么样anneal的。。。。 |
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n******d 发帖数: 680 | 30 合成末端磷酸化的互补oligo,然后在TE中变性复性,用T4 ligase连接,oligo记得过
量加
长出来的clone基本都是,不过最好在合成的oligo中设好合适的酶切位点
章也 |
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b******k 发帖数: 1874 | 31 这个正是太巧了。我也想问这个问题的。可否再详细一点?
oligo默认都是末端Pi的吧?
怎么在TE中变性复兴?oligo的浓度、反应的时间?和载体的比例,连接时?
过量加长?
谢谢 |
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l*********s 发帖数: 5409 | 32 Nay, the 5-prime end of synthesized oligos is normally hydroxy group, you
need to order additional modification.
For annealing, water is also OK.Just throw oligo solutions in boiled water
and let it cool naturally.
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a***e 发帖数: 1010 | 33 when u order oligo, the end is -OH, you have to kinase first by T4 PNK.
you can kinase (+) & (-) strands together in 50 ul volumn. then boil it
in water, let the water cool down on bench gradulately.
then it is enought for ligation. |
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b******k 发帖数: 1874 | 34 so, if i am going to ligate two tandem short fragments (say, 50bp each):
synthesize 50nt oligo of Sense and antisense (with 5' phosphate group modifi
cation),
anneal them by boiling and cooling naturally,
then ligate the annealed fragments (ideally, with synthesizd 3' overhang fro
m first one, and 5' overhang from 2nd)by conventional T4 ligase system?
thanks. |
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b******k 发帖数: 1874 | 35 T4 pnk:
Catalyzes the transfer and exchange of Pi from the γ position of ATP to
the 5 -hydroxyl terminus of polynucleotides (double-and single-stranded
DNA and RNA) and nucleoside 3-monophosphates. Polynucleotide Kinase also
catalyzes the removal of 3-phosphoryl groups from 3-phosphoryl
polynucleotides, deoxynucleoside 3-monophosphates and deoxynucleoside 3
-diphosphates (1).
Thanks a lot.
sounds like I need to go over some basic, get confused.... |
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c*********r 发帖数: 1046 | 36 Thanks a lot!
Do I need to purificate the product of anneal before ligation? |
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g*********5 发帖数: 2533 | 37 design a long primer and use quikchange kit do insert mutation. |
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i***a 发帖数: 11095 | 38 PCR的时候不需要底物,加设计好的两条引物就Ok了 |
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h*****9 发帖数: 4028 | 39 干过此事。很容易。从95度起设几个梯度用PCR仪逐渐降温即可。
章也 |
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x*****e 发帖数: 309 | 40 贴个我的做法吧,成功率很高,供参考。
1、引物退火溶液Annealing buffer: NaCl 100 mM, Hepes 50 mM, pH 7.4
(1ml: NaCl 2M 50ul, HEPES 1M 50ul, 加水至1 ml,pH试纸调pH)
2、引物浓度约=28.3ug/OD, 加入94ul Annealing Buffer 至终浓度 0.3 mg/ml
3、加入上下游引物各10 ul,Annealing Buffer 30 ul,90度4分钟,70度10分钟,然
后放到500 ml装有70度热水的烧杯中,室温冷却后连接或-20度保存。
4、连接质粒,加入2ul退火后的产物,1 ul T4 DNA ligase buffer, 1ul pSR/BglII+
HindIII 线性质粒, 5 ul 水,1 ul T4 Ligase. 连接(16度过夜或室温30-120分钟)。
5、加入1 ul Bgl II 至连接产物中,37度消化30分钟,转化感受态细胞。
6、挑取转换子,提质粒,酶切鉴定,注意阴性克隆切出条带大概1kb(227,248和
281bp条带差异不明显,故对 |
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s********n 发帖数: 2939 | 41 设计oligo的时候可以把粘性末端设计好,链接前可以不用做酶切。
我试过的一个protocol,非常简单好用:
1. oligos用TE or H2O溶解,浓度100 uM;
2. 磷酸化准备如下,37C一个小时, 70C for 10 min.
15 ul H2O + 2 ul oligo (100 uM) + 2 ul T4 ligase buffer + 1 ul TNK
3. 退火反应如下,95C 5 min in PCR cycler,RT for 30 min.
18 ul H2O + 1 ul oligo F + 1 ul oligo R (final 0.5 uM fragment)
这个产物可以直接用于连接。 |
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c*********r 发帖数: 1046 | 42 谢谢smartkevin 奉献简单的protocol! |
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g*********5 发帖数: 2533 | 44 I think mutation is the easiest way to do. just with quikchange kit, about
200 bucks.
because your pcr fragment is smaller than 30 bp, so you could design primer
with this sequence and flanked with vector sequence, 15 bp each, then use
this 60 bp primer pair do insert mutation, just one PCR and transform.
good luck |
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X***n 发帖数: 366 | 45 我的做法是:
1. Linearize plasmid with restriction enzymes.
2. 1 uM sense and antisense strand in Qiagen EB buffer, 95oC 5min, turn off PCR machine directly.After half an hour chill it on ice.
3. 10-100 ng linearized plasmid plus 1 uL 1 uM annealed insert, 5 uL fast ligation system, RT. 10 min.
4. Transform DH5alpha competent cell.
I don't think you need to phosphorylation of the insert.It works for me. |
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b******k 发帖数: 1874 | 46 3'prime of oligo is default hydroxy group,right? not 5'prime.
why do we need to add 3 prime Pi to the oligo before annealling?
thanks. |
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b******k 发帖数: 1874 | 47 for this topic, many ppl replied. I have compiled some of them here. (btw, s
ome of them are better than the one marked). while majority of ppl suggest t
o add Pi tto oligo 3' end by TNK, I don't know why. Anyone could help give r
elated mechanisms? Thanks a lot.
???: smartkevin (Biofuels), ??: Biology
? ?: Re: ????:?????30bp?DNA fragment ???vector?
???: BBS ????? (Tue May 18 04:01:41 2010, ??)
??oligo?????????????,???????????
??????protocol,??????:
1. oligos?TE or H2O??,??100 uM;
2. ???????,37 |
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a*****a 发帖数: 32 | 49 看到文献说先将DNA和98%Formamide或者0.1M的NaOH 1:1 混合,然后95度30分钟,然后
跑6M的Urea Gel就能分开两条互补链,但是实际上不行,如果加热95度30分钟,
会导致跑胶出现N条带(N>6, 可能是因为Tm值介于75-80,过高,导致部分aneal);
如果不加热的话,aneal在一起的双链DNA (一条30bp,一条40bp) 的band又占了主要。
有没有哪位高人知道如何能将两条互补的DNA链跑出单链的band出来?
万分感谢! |
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w*****n 发帖数: 310 | 50 应该挺简单的,照这个配下buffer https://products.appliedbiosystems.com/ab/en/
US/adirect/ab?cmd=catNavigate2&catID=603425 sample 95度3-5分钟,不用30分钟,
那是给大片段用的,200以下SSR之类的5分钟就够了,时间太长了引起降解(大片段掉俩bp
看不出来),确实会出N条带,冰上放一会儿(把泳道吹干净了),尥蹶子跑吧.然后染色,切
胶回收,(一条30bp,一条40bp是很大的差异了,一般差2bp就可以保证质量了)。 |
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