i******k
发帖数: 4625 | 1 测原子光谱可行不？
BTW, 难道不能简单的试试NTA-Ni resin? |
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C*******e
发帖数: 4348 | 3 改一下，我查了查，Pierce的Glutathione Agarose要便宜近一半（160刀10 ml）
有人用过么？ |
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b******n
发帖数: 4225 | 4 好像国内有人卖的，号称价格只有GE的1/3
你去水木清华的生物版问问看 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 7 老板不算扣的人
只是最近组里另外一些人花钱比较多
然后凑在一起，就有点难
240刀一个人是不多，但是我们6个人都要用啊，100 ml就是1500了 |
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g*****p
发帖数: 451 | 8 GLUTATHIONE AGAROSE BEADS 10ML from BD BIOSCIENCES ----132
我看到的是我们学校的价格
不过各个学校应该差不多吧
折扣现在最多也就10%
不过我没用过 |
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m*******r
发帖数: 4468 | 12 11点回家的时候， 看看实验室， 走进蛋白纯化的地方 听到什么东西滴答滴答的响，
仔细一看， 一台fplc跑干了， 上面还连着一个说s200 16/60的柱子, resin 都开叉了
。 看了一看booking sheet. 是一位华人同事， 还是RA， 我想， 那我帮你收场吧，
结果做了pumpwash以后pump 还没有rehydrate, 这台老的fplc 的pump 在里面， 我不
知道怎么rehydrate 他， 拿没办法了， 帮补了你， 只能留长纸条了。周一早上大家
来发现吧， 要不是我停了，要干着过周末了。幸好我们这里有5跟这种大的s200，不靠
着一根。 发生这种事情真是eye sore, 我不是当事人， 都有点不爽了。
this is fucked. 周一要有drama了。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 14 It's normal that the protein order from the company may have precipitation
or denatured fractions during storage. Those will stuck in the resin.
Therefore, a 70% recovery rate is not bad.
P.S....."千老之王"...Me Ft... |
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c**a
发帖数: 94 | 15 his tagged 的蛋白用nickel resin纯化出来,在elution buffer里, buffer里有
imidazole, sodium
phosphate. 一共1ml. 以后需要做activity asssy, 请问怎么保存才能不失活性?
是不是要加protease inhibitors, glycerol? 加多少glycerol? 冻-20还是-80? |
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E**********y
发帖数: 991 | 16 请发到：m**************[email protected]
Eur J Esthet Dent. 2007 Summer;2(2):188-209.
Clinical approach to anterior adhesive restorations using resin composite
veneers.
Mangani F, Cerutti A, Putignano A, Bollero R, Madini L.
Department of Esthetic Dentistry, School of Dentistry, University of Rome
Tor
Vergata, Italy. |
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T**********t
发帖数: 1604 | 17 我一直用invitrogen的Dynal beads，不过没比较过别家的，不知道是贵还是便宜。我
觉得不便宜就是了。magnetic beads肯定比普通的beads方便，损失也小一点。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 18 另外，你分离400bp和100bp的DNA，为什么不用胶？虽然没有beads方便，不过便宜太多
了。 |
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m**i
发帖数: 47 | 19 多谢多谢。
我也想过用胶。 如果我需要处理10mg的DNA, 怎么能把这么大量的DNA跑上胶然后提出
来呢？我以前只用过kit处理个几ug. |
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w******e
发帖数: 1187 | 20 why not recycle the beads afterwards?
small |
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m**i
发帖数: 47 | 21
真的可以recycle吗？ 我到从来没有试过。谢谢。 |
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w******e
发帖数: 1187 | 22 I never tried myself either hehe. theoretically, there is a kd involved
(though it's very very low) so you can compete the DNA off. or some
harsh condition (heat, NaOH, etc) may elute the DNA off. don't know
whether you can still use the beads after that thou hehe |
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T**********t
发帖数: 1604 | 23 怎么recycle啊？streptavidin-biotin的binding很紧的，PCR都掉不下来，要洗下来除
非吧streptavidin denature了，可是那样一来不就没法recycle了？ |
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T**********t
发帖数: 1604 | 24 10mg，太生猛了，沉淀下来都会是一大坨吧。
不过用大胶，制备胶，多跑几块应该也能搞定吧。。。就是纯粹是个体力活了。 |
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w******e
发帖数: 1187 | 25 I agree:) the half-life should be ~10days, so if you add 100X excessive
biotin you might be able to recover your DNA after a month? hehe
but I thought PCR should be good? remember reading somewhere
ppl use heating for elution.
anyway, probably not worth it (though I'm indeed curious:) |
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m**i
发帖数: 47 | 26 我看了NEB家的elution的条件是75C的Tris-HCl （pH 7.5)，也许streptavidin
denature了等凉了之后还能在refold? pierce家的让用Guanidine-HCl,肯定就没法
recycle了。 |
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w******e
发帖数: 1187 | 27 I tried gel extraction kit w/ 10ug+ DNA and worked fine.
I tried even higher amount w/ YM columns and got great recovery. they can
be reused too. but don't know whether that's compatible w/
gel extraction buffer |
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T**********t
发帖数: 1604 | 29 对了，这么大量的DNA,跑胶不如跑柱子了。跑个sephadex柱子，400bp和100bp应该很好
分吧，洗下来乙醇沉淀一下。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 30 用heating来elute是要加变性剂比如SDS的，光是加热掉不下来。正常PCR cycling上百
个循环都没事。 |
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m**i
发帖数: 47 | 31
之前也有想过用柱子，但是怕recover的不好。那10mgDNA我是做了几千个PCR得到的，
感觉超级珍贵。。。不过实在不行，也是值得试的方法。谢谢 :) |
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T**********t
发帖数: 1604 | 32 可以先跑个small scale的看看。我刚才说错了，用sephadex估计分不了，你的样品估
计要用Superdex 200来分，我没跑过DNA的制备柱，但是理论上应该比蛋白难不了多少
吧。 |
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m**i
发帖数: 47 | 33 多谢。superdex 200看起来好像能work。到时候不行就试试这个。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 34 就是不知道一次上样量能多少。你可以先少上一点，然后慢慢加。反正柱子是反复用的
，绝对renewable。最后就是洗脱体积大一点。用concentrator浓缩一下再乙醇沉淀，
应该recovery也不会太差吧。总的来说比beads便宜，比跑胶方便。 |
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m**i
发帖数: 47 | 35 说起这个concentrator, 有没有什么好用的东西呀？我每次都用QIAGEN的Maxi prep去
除蛋白，浓缩 DNA，但是产量从来没有超过60%。 |
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g*********r
发帖数: 9366 | 36 the problem is
1. you need buy the column ( no media inside) which is not cheap either
2. the packing of gel filtration column need the most experienced person
you decide
the resin is fine |
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s******y
发帖数: 28562 | 37 Depnding on really what do you need to do.
If you want to simply seperate the agregate from soluble protein,
you can buy those 10 cm disposable columns and pack the resin by yourself.
It is not too difficult.
Or, you can just do a ultracentrifugation with a sucrose cushion to seperate
the aggregate. |
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l**n
发帖数: 109 | 38 有啊，
1ml的枪头垫上玻璃棉再填resin，每根柱子的成本不超过0.5人刀 |
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s******y
发帖数: 28562 | 39 try to check if there is difference in PI value between your protein and the
GST protein. If there is, then you can use ion exchange column to seperate
the GST protein and your GST-fusion protein after the glutathione-resin
pulldown. |
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l*********s
发帖数: 5409 | 40 how about reusing GST resin? |
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m**z
发帖数: 787 | 41 没那么贵吧。。。怎么影响当中是4、5千？anyway,自己pack会便宜不少，就买空柱子
和resin。
取决于你的用途吧，也许一般的Q柱子就可以了。。。如果实验室买来也用的不多的话
，其实也蛮浪费的。。。 |
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m**z
发帖数: 787 | 42 结晶的话可能的确用mono Q好一些。这样的蛋白量不一定要你说的那个size的column吧
？小一点的就行了,还能减少些dilution during chromatography. 或者你们实验室貌
似已经有柱子了，自己买点resin来pack吧，便宜很多，应该也挺好用啊
能美 |
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K**********e
发帖数: 188 | 43 生物基础研究到底多烧钱？
最近让lab manager做了一年的财务报告，结果还是让我很吃惊。尽管我知道自己属于
学院里给学生发补贴最高的实验
室之一，但人工费只是占据了开销的20%左右（当然，如果按照973、自然科学基金的人
工费支出比例，这还是远远超
额的了），而最大的费用花在了试剂耗材上，占到了50%以上。当然，最初建实验室买
了一批仪器，所以这一年的仪器
费用比例就比较少。
我最近在思考一个问题，就是生物基础研究到底多烧钱？在美国，对生物学科的投入非
常之巨大，他们傻吗？
目前生物基础研究作为重要的学科之一，与社会经济生活也密不可分。我们的经费主要
投入在以下几个方面：仪器、耗
材、测试、房租物业水电、人工费用（因为固定人员的工资是由学校负责，所以这个人
工主要是对学生和技术员而
言）。
这其中，人工费用等于是返还到了纳税人手中。我不知道某些经费资助部门怎么这么想
不明白，非要给人工费设定一个
这么低的阈值（不超过10%）。也许由于我自己经历的原因，我赞同给博士生博士后高
工资。大家都不是不食人间烟
火，博士生待遇在国内外的巨大差别也是我们对于缺乏吸引优秀学生竞争力的原因之一
... 阅读全帖 |
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s******r
发帖数: 2876 | 44 生物不算烧钱，不过烧掉了很多人才，
这些孩子一样聪明，本来能给国家民族做点贡献的。
生物基础研究到底多烧钱？
最近让lab manager做了一年的财务报告，结果还是让我很吃惊。尽管我知道自己属于
学院里给学生发补贴最高的实验
室之一，但人工费只是占据了开销的20%左右（当然，如果按照973、自然科学基金的人
工费支出比例，这还是远远超
额的了），而最大的费用花在了试剂耗材上，占到了50%以上。当然，最初建实验室买
了一批仪器，所以这一年的仪器
费用比例就比较少。
我最近在思考一个问题，就是生物基础研究到底多烧钱？在美国，对生物学科的投入非
常之巨大，他们傻吗？
目前生物基础研究作为重要的学科之一，与社会经济生活也密不可分。我们的经费主要
投入在以下几个方面：仪器、耗
材、测试、房租物业水电、人工费用（因为固定人员的工资是由学校负责，所以这个人
工主要是对学生和技术员而
言）。
这其中，人工费用等于是返还到了纳税人手中。我不知道某些经费资助部门怎么这么想
不明白，非要给人工费设定一个
这么低的阈值（不超过10%）。也许由于我自己经历的原因，我赞同给博士生博士后高
工资。大家都不是不食... 阅读全帖 |
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m******5
发帖数: 1383 | 45 1 resin 稀释后加，直接吸柱床密度都不一样当然不准 |
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e****s
发帖数: 1125 | 47 清洗Resin我一般都是用那种小的针头，用真空吸干，又快又干净。
不管怎么做IP定量的误差率应该都至少在30%左右。 |
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h********r
发帖数: 519 | 48 Transcriptional responses in honey bee larvae infected with chalkbrood
fungus.
Aronstein KA, Murray KD, Saldivar E.
BMC Genomics. 2010 Jun 21;11:391.PMID: 20565973 [PubMed - indexed for
MEDLINE]Free PMC ArticleRelated citations
2.
Proteome profile and lentiviral transduction of cultured honey bee (Apis
mellifera L.) cells.
Chan MM, Choi SY, Chan QW, Li P, Guarna MM, Foster LJ.
Insect Mol Biol. 2010 Oct;19(5):653-8. doi: 10.1111/j.1365-2583.2010.01022.x
. Epub 2010 Jun 7.PMID: 20546039 [PubMed - ... 阅读全帖 |
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d*****r
发帖数: 2583 | 49 ☆─────────────────────────────────────☆
timeonly (圆满) 于 (Thu Dec 23 15:28:05 2010, 美东) 提到:
发信人: desesperado (Estoy), 信区: Military
标 题: 方舟子谈蜂蜜：基本上是高浓度的糖
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Dec 23 12:11:10 2010, 美东)
http://discover.news.163.com/10/1223/10/6OJ4ABLE000125LI.html
核心提示：方舟子认为用人工的方法，可以制造出一种与蜂蜜一模一样成分的东西。其实蜂蜜并不神秘，基本上就是高度浓缩的糖。蜂蜜除了水分，剩下的几乎都是各种各样的糖。蜂蜜的成分会有变化，但大同小异。
中青在线-中国青年报12月23日报道 什么是蜂蜜呢？这个问题似乎很简单，是蜜蜂采集花蜜酿造出来的甜味物质。蜜蜂把花蜜吸到它的第二个胃 ——“蜜胃”里面，在那里进行消化（让花蜜中的蔗糖大部分转化成果糖和葡萄糖），回到蜂巢吐出来，让水分蒸发、浓缩，这样，原来
含水分大约 80%）... 阅读全帖 |
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c*********r
发帖数: 1312 | 50 能分享一下为什么很多人鄙视crosslink做出的co-IP吗？什么样的control比较好。我
用两种control：1. 没加抗体，只用Protain A/G的resin；2. 用同样动物（兔子）的
IgG，但是是不针对我的体系里任何蛋白的抗体，也就是non-relevant antibody。 |
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