l******n
发帖数: 298 | 1 谢谢，我觉得第一个问题你回答的很好，第二个问题，可能我没说明白，我的意思是说
先OHT给药，然后停药以后给骨髓bone marrow mononuclear cells. 新分化的组织如心
脏或血管不应该再有b-gal，因为这部分从骨髓或周边血来源的分化的组织在给药的时候还没有smooth muscle promoter的活性。
所以我觉得新分化的组织，从骨髓来源的，或者是Bone marrow mononuclear cells来源的，不应该再有蓝色的X-gal阳性显色。 |
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b*****n
发帖数: 1841 | 2 搭车问一个，有没有人用CreER诱导表达toxin然后特异性地杀死一些细胞的报道？
CreER leaky 有多严重？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 3 听得我莫名其妙。
你到底在做什么试验？cre连在什么promoter？心脏和血管和骨髓没有关系的，
除非你说的是心脏和血管里面跑的血细胞。
而骨髓和周边血又什么时候突然可以分化成平滑肌了？
时候还没有smooth muscle promoter的活性。
来源的，不应该再有蓝色的X-gal阳性显色。 |
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S******9
发帖数: 2837 | 5 我做的系统ko，leaky就很严重，有70～80%。
最近做的内皮的，deletion不是想象中那样好，大概60～70%，估计是2个老鼠合在一起
分细胞，也许只有1只deletion了，真不好说，准备单只单只做，这样内皮细胞长得慢
一些，但是应该结果可靠。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 6 哦，原来你说的是干细胞啊，我还以为你在说胚胎发育过程的问题呢。
你说的那个问题我还是没有完全听明白。因为我不是做你们那个领域的。
但是我猜你想说的是，那个ER是连在smc promoter 上的，所以如果在处理
的时候，如果某些细胞不处于smooth muscle 状态的话，就不会被诱导，对吧？
如果你是这个意思，那么答案就是，大致如此。但是得多重复几次，因为
leaky expression 会是一个问题。
I |
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D*a
发帖数: 6830 | 7 tamoxifen? 那怎么又是拿出来处理？拿出来
有时候小鼠存活率不高，也可能是死了之后或者半死不活的时候再被吃的，你们观察过
存活率么？老鼠动的正常么？小鼠会吃奶么？一般正常B6小鼠在没奶的情况下可以撑一
天多才慢慢被饿死，如果你们的老鼠看着就半死不活的，那可能不是被咬死的。
奶妈推荐某些129，性情温顺，怎么折腾都不反抗的那种。我后来寄养都直接扔进去，
连尿都不抹。。。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 9 貌似是tam要经过肝代谢，记得是七天的时候浓度代谢到最大还是怎么的。对老鼠有毒
性，等代谢没了，你才能测阿，要不然测的是tam的毒性表现了。不是我的project，都
是讨论听来的。总之就是要代谢。
而且从cre进核到KO也得时间吧。从KO到原来已经合成的蛋白质代谢没了也要时间吧。
从蛋白质没了到蛋白质上下游通路随之改变也要时间吧。
有好几种，分吃的注射的etc，我明天瞅瞅我们用的是哪种。我们是直接ip注射的
搞个最佳回答有包子，怎么搞得好像别人欠你似的。 |
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D***y
发帖数: 693 | 10 in vitro 用4-hydroxytamoxifne, 是tamxoifen 的代谢产物，效果比tamxofien高几十
倍。 |
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D***y
发帖数: 693 | 11 in vitro 用4-hydroxytamoxifne, 是tamxoifen 的代谢产物，效果比tamxofien高几十
倍。 |
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l*****4
发帖数: 267 | 13 神经生物学的牛人来帮忙啊
给讲一下tamoxifen这种涉及到雌激素受体药对大脑功能和行为的影响
谢谢 |
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a*****s
发帖数: 131 | 18 Great - thank you.
I ordered t5648 today. |
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s******r
发帖数: 2876 | 21 谢了，不过paper上是给p1的小老鼠打针，就是不知道怎么个打法。 |
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b********h
发帖数: 348 | 23 给新生鼠打针要从胸的皮下进针向腹部伸过去再扎入腹部，能防止返流溢出来。 |
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s******r
发帖数: 2876 | 24 受教了，
google了半天，发现也有用皮下注射的，还有用intragastric的，
就是不知道哪个效果好。
给新生鼠打针要从胸的皮下进针向腹部伸过去再扎入腹部，能防止返流溢出来。 |
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O******e
发帖数: 4845 | 25 注射的目的？最温和的就是加在孕鼠的食物或者水里面 |
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D*a
发帖数: 6830 | 26 大部分paper是给哺乳期母鼠打针或者喂的吧？ |
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S******9
发帖数: 2837 | 27 能详细说明一下么？
针头用多大的？大概是胸部的啥位子进针，跨过膈？左侧？ |
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S******9
发帖数: 2837 | 28 我也面临这样的问题
第1次的全部还好，后面有几次死一些，但是1周内还是陆续有死的
最后好像活的不多。
这个真的是一个麻烦的事情。
gastric lavage还没试过。 |
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b********h
发帖数: 348 | 29 从任何方便皮下进针的部位进去，在皮下下行至腹部，再往深一扎扎进腹腔注射。之前
皮下下行的这段距离就是起个防止返流的作用。针头越细越好。 |
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f*******e
发帖数: 354 | 30 做neonatal HSC 移植是从面部静脉注射的，不知道可不可以用来打药 |
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b*****n
发帖数: 1841 | 32 搭车问几个问题：
有没有在几天大的小鼠打tamoxifen的？
有没有特异表达毒蛋白杀特异细胞的成功经验？
CreER表达很低（正常诱导<10%）有没有成功提高到50%以上的？ |
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l********s
发帖数: 70 | 33 tamoxifen 用来做条件性敲出的。谢谢各位大侠啊！ |
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z****u
发帖数: 1007 | 34 Tamoxifen拿corn oil 配成20mg/ml 浓度。然后每天给成鼠注射4mg IP. 成鼠对此表示
无压力。情绪稳定。有的protocol还拿酒精稀释。我的经验是那样经常会把老鼠打死。 |
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n********k
发帖数: 2818 | 35 Tamoxifen拿corn oil 配成20mg/ml 浓度。然后每天给成鼠注射4mg IP. 成鼠对此表
示无压力。情绪稳定。
How many days can you inject without killing them? how old are the mice? i
am trying to get your dosing(ours are at between 150mg-180mg/kg)
有的protocol还拿酒精稀释。我的经验是那样经常会把老鼠打死。
Yes, with this one, at our dose, the mice feel the stress after 3 days and
cannot tolerate more than 6 days...lethality could be up to 20-30% with 6-7
doses... |
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l********s
发帖数: 70 | 36 先做成鼠，实验室买的是 tamoxifen-citrate 注射的。估计这个只能feed，不能注射
谢过这位大哥了！ |
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l********s
发帖数: 70 | 37 非常有用！，谢谢，我看很多是酒精稀释的。 我们暂买的是 tamoxifen-citrate
非常感谢您！
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z****u
发帖数: 1007 | 38 我就是拿Sigma的corn oil 20mg/ml就是最大溶解度了。 37度下溶解。然后冻存。剂量
4mg/30g ..差不多就是150mg/kg. 老鼠年龄3周以上。 一般打2-4天。看Cre的效率了。
有的cre很好，一天就够。想要保证高效的就打4天。so far还不错。没打过超过4天的
还。
酒精稀释感觉坏处很大。 一来把tamoxifen稀释了，注射volume得提高，再来酒精打到
腹膜下反应很大，有好些老鼠甚至当场死亡。
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b*****n
发帖数: 1841 | 39 搭车问：
Topical application真的能只在涂抹的地方敲除吗？
有的说可以，效果很好；有的说这种情况tamoxifen需要转运到肝脏代谢然后分布全身
，其实跟IP的效果差不多。 |
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G********e
发帖数: 528 | 40 核酸是水溶性的，为什么要加有毒的DMSO?
你找错文献了 |
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w*e
发帖数: 740 | 41 从小鼠腿部和腹部交界处进针，用胰岛素注射针， 非常细的那种。
多练习，很少流出来，我们以前天天做，没问题 |
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n***w
发帖数: 2405 | 42 BrdU在水里最多是10mg/ml...然后我用的剂量是100ug/g body weight....
所以得配高浓度的BrdU... 所以就需要用DMSO... |
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t******k
发帖数: 599 | 43 其实我用的针头是27的。。。
对我的话灌是最容易的了，让动物房的人做就行，就是小小鼠太小不知道能不能灌，妈
妈的话又有风险。。。 |
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G********e
发帖数: 528 | 47 你确定你用100ug/g？如果你用100ug/g，打一只20g的老鼠也就需要2mg吧，配在水里也
就需要200ul
难道你用100mg/g？这绝对是天价
如果我计算没错的话，那就是你错了，brdu配在水里注射非常容易 |
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n***w
发帖数: 2405 | 48 我没算错阿。。。
我确定我用100ug/g body weight。
我下次可以配在水里试一下。
谢谢。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 50 100ug/g浓度高吗？我就是看了文献里用了这个浓度，所以就上了，反正也work。。。
我就是看retinal cell proliferation... |
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