t******k
发帖数: 599 | 1 哎 今天换了insulin注射器（30g）的还是都漏了，搞得动物房的工作人员都集体开会
讨论具体该咋办了。。。 |
|
D*a
发帖数: 6830 | 2 你打小奶鼠的话它妈也会去舔啊，还有大家互相吃粑粑，也会吸收tam的吧，当然吸收
得少点。 |
|
t******k
发帖数: 599 | 3 那要咋办才好呀，我都有放弃做postnatal的冲动了 |
|
h**q
发帖数: 22 | 4 温柔一点灌
Tip放嘴里，不插到胃里，找对位置了可以看到它drinking |
|
a*******n
发帖数: 156 | 5 联系国内的化学公司，买回来打个质谱做个NMR确认一下就好了 |
|
|
|
|
D*a
发帖数: 6830 | 9 还是先看看效率吧，老鼠可是最基础的实验材料，省了这几百块，后面kit抗体时间赔
的更多啊。 |
|
D*a
发帖数: 6830 | 10 我自己不做这个，我们实验室有做的，我也是道听途说。或者你要用便宜的，好像是怎
么经过肝脏之后才能有效，可能就更慢点？ 他们当年不光查pubmed文献还查了药代动
力学，市面上各种tam的分子的区别和代谢途径（胃or注射）的区别什么的。
好像应该是五天以后才慢慢积累到足够剂量吧，所以要再等几天才能KO
我们都是至少一个月以后再看KO效率的 |
|
|
D*a
发帖数: 6830 | 12 今天刚问了，OHT是tam肝脏代谢后的产物，也是真正有毒性和产生KO的分子。
我们实验室里他们用的是普通的tam，打成年鼠。 |
|
|
l******n
发帖数: 298 | 14 多谢你。是的，tam代谢以后成为有活性的4-OHT.我再鼓捣鼓捣。刚开始用这个ER老鼠
，还不太熟悉。 |
|
l******n
发帖数: 298 | 15 高手，谢谢哦。你说对了，我这个ER表达很低。不过我这个不是cre-ER system的KO.我
这个是knockin一个human transgene on top of endogenous gene, to check the
ectopic overexpress of the protein.我老板说ER正常情况下抑制这个蛋白，一旦加
了OHT,蛋白就活了，我不太懂原理，就是跟着做了。
这种情况tam or OHT有区别吗？
blame |
|
D*a
发帖数: 6830 | 16 你还是要自己摸索条件，新模型逃不了证明efficiency这一关
另外前期好好试有很多好处的，听很多人说打tam打死一批老鼠的，我们就没有这种情
况，因为条件摸得好，基本上不损失老鼠，KO效率也很高。 |
|
|
D*a
发帖数: 6830 | 18 这个不好意思，因为我只是打酱油的，所以不方便说太详细，只能说说大概。
反正我们选creER之前基本上都是把市面上的所有我们想要的cell line的cre的papers
和引这个cre的papers看了一遍，确定Tam之前也差不多是这么弄的，后来又自己试了两
三个dose。 |
|
H*******g
发帖数: 321 | 19 确诊差不多快两年了，现在治疗在什么阶段？
除了年龄外，乳腺癌很重要的一个预后指标是雌激素/雄激素受体的状况。如果是阳性
的话一般预后比较好。
国内的治疗方案不熟悉。美国现在早期乳腺癌的生存率很高了。一般术后化疗或是放疗
，激素受体阳性的话还可以接着用tamoxifen或是aromatase inhibitors（后者只能用
于绝经妇女）。如果her2阳性的话，可以用herceptin或者叫trastuzumab。如果是激素
受体阴性的话，特别是her2也是阴性的话，目前没有什么好的target therapy。现在
parp inhibitors还在trial阶段，结果还不好说。 |
|
C***k
发帖数: 1570 | 20 email:c**********[email protected] thanks!
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23213131
BMJ Case Rep. 2012 Dec 4;2012. pii: bcr2012007411. doi: 10.1136/bcr-2012-
007411.
Tamoxifen-associated Budd-Chiari syndrome complicated by heparin-induced
thrombocytopenia and thrombosis: a case report and literature review. |
|
b*****n
发帖数: 55 | 21 我用MerCreMer/tamoxifen体系把成年心脏的某一蛋白敲除后，心机细胞的核变得很大
。请问有什么可能会导致这种现象？敬请指教我应该还做些什么工作以确定其机制？ |
|
z****u
发帖数: 1007 | 22 这个很难address.我也遇到过。是tamoxifen诱导的leakage
但这个leakage是组织相关的。有的组织，promoter相关基因表达低，就没有leakage,
有的组织高表达，就会leak. |
|
t******k
发帖数: 599 | 23
那我也不灭了。之前拿到的一个protocol说是要灭菌的，然后看其他的protocol又没说 |
|
|
|
j****1
发帖数: 81 | 26 Here is another abstract, because I have to write two abstracts for my
qualifying exam.
----------------------------------------------------------------------------
-------------
Not only are neural stem cells important in learning and memory, they are
also potential therapeutic approaches for neurodegenerative and other neural
pathological diseases. Adult neurogenesis occurs in the subventricular zone
(SVZ) of the lateral ventricle and subgranular zone (SGZ) in the
hippocampus (Suh et al., 2009... 阅读全帖 |
|
l**********1
发帖数: 5204 | 27 RE LZ
pls refer
PMID 21063464
Liu Y et al.
Tamoxifen-independent recombination in the RIP-CreER mouse. (2010).
PLoS One. 25: e13533.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21063464
>There are at least two possible explanations for
>these discrepancies.
>One possibility is that after many generations
of backcrossing to the C57BL/6 background, the expression of the
randomly integrated RIP-CreER transgene is enhanced, thus
increasing the probability of its nuclear entry, even in tamoxifenuntreated
cel... 阅读全帖 |
|
s*****i
发帖数: 315 | 28 试试这个
Universal Cre genotyping
Forward primer: ACCAGAGACGGAAATCCATCG
Reverse primer: CCACGACCAAGTGACAGCAATG
94oC 3min
94oC 30s
58oC 30s
72oC 40s
72oC 2min
4oC hold
Positive 400bp band.
genotyping |
|
|
|
B*N
发帖数: 455 | 31 如果不加DNA也能扩出斑的话，很可能是气溶胶污染了，PCR产物蒸发在空气里，或者在
piptte的内壁上了。我是后来换了房间用别人的枪做就好了 |
|
i*********0
发帖数: 915 | 32 最近我们这边的cre也是又问题，以前都是结合着actin （作为内参），cre和actin的
带都很sharp，现在不管怎么还条件都是smear。隐约能看到cre的带，但是actin基本上
看不到。 |
|
b*******0
发帖数: 48 | 33 我曾经也遇到过，后来降低了annealing temp,就好了。不过现在变成所有sample都带
条带了，本来work的control也不work了，很头疼。 |
|
|
p****o
发帖数: 133 | 35 我也想问一下，我的一直都是cre 100bp的条带很清晰。但有一个问题，postitive的
100bp条带very very very strong,但negative的也有很弱的条带。开始我还以为电泳
加样时不小心污染了，但试了很多次，从PCR从头来过，还是这样。我把那些很弱很弱
的条带都当negative了。希望没有弄错。 |
|
f*******a
发帖数: 671 | 36 我准备买一个有荧光的reporter mice，和我的xxx-creERT2交配，在1~2个月的时候给
tamoxifen
,2个月的时候观察脑袋.但是听说有的不太敏感，太敏感的又不太特异。Jackson上面选
择太多了。有人能推荐一下吗？或者给个Jackson Lab的链接。
用ROSA在成鼠好像不太表达，所以不打算买这个。 |
|
|
S******9
发帖数: 2837 | 38 可以用。
我现在打新生鼠还不能用etoh配，单纯的oil配，需要70-80度溶解药物，然后分装，每
次用以前只能再次65度溶解以后快速赶到老鼠房去打针。 |
|
t******k
发帖数: 599 | 39
为啥新生鼠不能用etoh配啊？有什么讲究么？ |
|
n****3
发帖数: 543 | 40 我认为用cre作对照要好。许多文章已经发现cre对一些细胞有毒性，如果你的细胞对
cre敏感，建议用cre only做对照 |
|
e**r
发帖数: 1144 | 41 细胞分裂时核膜解体，是不是没有Tamoxifen也能重组？ |
|
h********8
发帖数: 49 | 42 索性把我最近看的文献的摘要发出来。有谁看到有趣的做癌症诊断的公司，麻烦告诉我
一声哈。谢谢！
约翰斯•霍普金斯大学Kimmel癌症中心
（文献1， 2012年11月） 不依赖于已知癌症基因组成而检查肿瘤DNA的方法。研究人员
从取自10位结肠癌和乳腺癌患者的血液标本里分离出DNA。然后，他们使用下一代DNA测
序技术读取了血液DNA中的全部基因组。结果显示，癌症患者的血液DNA都出现了染色体
拷贝变化和重排，而10个健康对照组成员的DNA没有异常。
癌症患者血液中来自肿瘤的DNA所占比例从1.4%到47.9%，差异很大。这种新检测法还可
能需要从肿瘤DNA低于0.1%的血液样本中检查出小的、可治愈的肿瘤。只需要做更多的
测序就能克服这些困难。这项实验有望在未来5到10年内用于临床
（文献2，2013年1月）利用常规巴氏检测（Pap test）获得的宫颈分泌物来检测卵巢癌
及子宫内膜癌。在一项初步研究中，研究人员采用这种命名为“PapGene”的测试方法
，依靠全基因组测序癌症特异性突变，检测出了全部24个子宫内膜癌，以及22个卵巢癌
其中的9个，准确率分别为100%和41%... 阅读全帖 |
|
b*******0
发帖数: 48 | 43 我主要做conditional knockout mice model. 用tamoxifen inducible 在成年老鼠敲
出某个基因使得老鼠致死。
表型很稳定，明显。因为是全身敲出，感兴趣的蛋白主要在大脑起作用。所以想到脑干
心跳呼吸中心出了问题。
western blot 也发现感兴趣的蛋白在脑干中明显较少。用fluorescence reporter 在
组织切片解剖结构发现，脑干控制心跳，呼吸的位置被激活了，问题是，这个蛋白在心
脏里也有少量表达，量也减少了。所以现在同时做一个heart specific knockout mice
确定不是心脏本身的问题。
因为这个表型预先没有料到，脑干也不是我们研究的特长，机理很难做。请问，如果有
个上面这些数据，能发一片什么样的文章。
多谢。 |
|
l**********k
发帖数: 189 | 44 您是说在Rosa26位置上放CreERT2? 如果是这样的话，虽然可以做Tamoxifen induced
cKO，但就没有tissue specificity了。而且，在有些tissue里可能效率不会很高。 |
|
h*******o
发帖数: 4884 | 45 老板打算合作去做一个brain specific的knockout，还要inducible， 对方说做Cre－
loxp, 然后用tamoxifen 去induce， 要求我们提供一个brain specific的gene 去放
Cre -ER
我查了几个常用的brain specific的promoter
BDNF，但是似乎不是brain specific， 因为retina， prostate，kidney 也表达
CaMKII BAC, 这个貌似用的人不多，但是好像有文献说适合brain specific的knockout
不是做这个的，对于KO的知识仅限于Cre LoxP了.
有没有好心人给点建议， 该用那个 gene来放Cre-ER?谢谢！ |
|
T****u
发帖数: 424 | 46 Why not cross with Liver specific CreER and induce with tamoxifen |
|
t******k
发帖数: 599 | 47 关于creERT2有一个问题想不通，如果不给tamoxifen，而只是转染一个flox-stop-flox
-gfp到细胞质里，那这个creert2可以起作用让gfp表达么？ |
|
F**i
发帖数: 43 | 48 我觉得会让GFP表达，我曾经电转creERT2和flox-stop-flox－GFP质粒，结果还没打
tamoxifen老鼠的细胞已经绿了。说明有leaky。
flox |
|
t******k
发帖数: 599 | 49 主要是最近想做个体外实验，利用cre-flox来标记细胞。一个方法是把floxed的质粒转
到本身有promoter-creert2的细胞里，另外一个方法是把cre质粒转到本身带有floxed-
reporter的细胞里面去，再有就是把两种质粒一起转到wt细胞里。然后就想到这个有
promoter-creert2的细胞不加tamoxifen是不是也可以起作用了。 |
|
t******k
发帖数: 5617 | 50 直接ROSA 26A位点knock in 做出flox mice，然后再和tetrocyclin或者tamoxifen
inducible cre cross.需要induce的时候打taboxifen或者喂dox就可以了 |
|
