s***e
发帖数: 911 | 1 这部分介绍Topoisomerases.
DNA复制时帮助解套的酶叫作 DNA topoisomerases,有两类:
Type I: 剪开一条单链,让另外一条单链通过,然后修复;
type two: 同时剪开双链, 形成一个门, 让DNA上别的部分通过,然后修复.
成熟的关于type II topoisomerase的理论20年前就形成了,叫作two-gate model:
1. enzyme附在DNA上;
2. 剪开DNA双链,形成gate;
3. 当别的DNA segment来时,从这个gate进去, 从enzyme另外一处出来.于是这enzyme
有不同的入口和出口, 称为two-gate model.
以上是被一系列著名实验支持的结论.
具体描述是这样的:
step1: topo II 是一个打开的钳子;
step2 : topo II附着在某DNA的某处,可以想象这剪刀卡在DNA上.此时钳子口
还是打开的,别的DNA segments可以进出;
step3: ATP附着在topo II上,导致钳子关门. 这时候如果已经俘获了另外一条dna
segment,它就出不去了;
s |
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l**********i
发帖数: 11748 | 2 这个10元左右
国家公园管理处能要到免费的地图
网上也可以下载有更多细节的、
hiking爱好者们标注的了很多POI的topo map
使用方法很简单很简单，不到1分钟就能学会
去个公园走走trail绝对丢不了
如果你会看topo map之类的地形地图，并且喜欢探险
可以试试off-trail
GPS系统包括24颗卫星，定位是靠卫星信号
如果手机有内置GPS的天线可以不用基站信号
基站信号的作用是帮助快速确定大概的位置
这样的话GPS根据卫星运行图就可以知道接收哪些卫星信号来定位
理论上只要4颗卫星就可以定位了
为了精确定位，一般会用7~8颗卫星
从GPS的卫星信息界面就可以看到
大山里手机没信号，但是卫星信号是全球覆盖的
你手机的GPS receiver给力的话是可以用GPS的
如果不给力的话请找空旷树木稀少的地带，高举手机
不过可能会很慢，而且很费电 |
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c*******0
发帖数: 5247 | 3 Why do you even need a Topo sort? Finding DAG is not a topo sort, it's just
used there. |
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h****n
发帖数: 1093 | 4 topo sort本身不难写，就是一个DFS
难的是怎么把问题map到topo sort上 |
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K*********n
发帖数: 2852 | 5 topo sort需要不需要先查找所有入度为0的结点，分别做topo sort？否则以哪个结点作
为source？ |
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c******n
发帖数: 4965 | 6 本人的尘埃落定， 多有感触， 版上大部分是小同学，偶尔有老年， 就跟这些老年工
程师们share 一下想法。
1） 最重要的是什么？ 时间！！ 老年工程师们生活中面对的最大问题，根本就不是工
作（either technical problems or politics at work), 而是孩子家庭：孩子在幼儿
园被抓了， 哪个老师给穿小鞋了。。 晚上给娃洗澡睡了， 再收拾一下，看看电视就
累得睡着了， 根本没有时间。
所以你要找FLG 必须老婆在家里把这些事情抗着。
总的准备时间： 绝对不能给自己上deadline, 所以如果你要是面临现在公司倒闭，必
须几号几号之前准备完，那很难。 我跟很多人的共识是，最少半年，一年比较有把握
。 我现在想想以前去面过flg 准备2星期最多一个月， 那完全是找死。 你做LC lint,
第3遍感觉就不一样了。
2） 认识， 给自己的bar, 你必须承认，现在的bar很高了。 我去面感觉，本来冠冕堂
皇地说要有解题过程， 但如果你不是一下子写出来，那些面试官似乎都很不屑。 刚毕
业小孩们确实都是一遍写出来。 所以你不能跟自己说啊那是不可能的， ... 阅读全帖 |
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a*******g
发帖数: 1221 | 7 为啥都要用topology sort呢？用topology sort解这题就跟用quick sort解一个数组的
最大值似的。这不是sort的问题，因为这里面没有排序，最后的要求是你要么输出“无
解”，要么输出一个最终解，没有排序。我说没有排序的原因是这里面你先算哪个格后
算哪个格没有关系的。直接递归O(MN)就出来了。如果用topo sort的话我想不出来能O(
MN)内能解决的，并且topo sort还得建一个dependency之类的东西，更麻烦。
def __init__(self):
# 这里面存着类似于{'A2':10, 'E3': 20}这种已经算好的值
self.cell2val = {}
self.computing = set()
self.icandoit = true
def compute(self, cell):
if not self.icandoit:
return None
if cell in self.cell2val:
return self.cell2val[cel... 阅读全帖 |
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m*******l
发帖数: 12782 | 8 ☆─────────────────────────────────────☆
kickok (淡定熟男) 于 (Thu Sep 15 13:35:17 2011, 美东) 提到:
Today, the U.S. Department of State (DOS) Immigrant Visa Control Office
issued a memorandum notifying United States Citizenship and Immigration
Service (USCIS) of the exhaustion of all employment-based visa numbers for
Fiscal Year (FY) 2011. Accordingly, please note, empolyment-based
applications for adjustment of status in the U.S. and immigrant visa
applications abroad will not be accepted and will ... 阅读全帖 |
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w*****r
发帖数: 385 | 9 elevation gain（海拔的上升）：
资料给出的数据都是指海拔的绝对上升，实际的行进中，一定会遇到up and down ,up
and down的情况，所以上升和下降的总量还可能远不止hiking资料中给出的数字。
比如给出数字是:1810m-2145m elevation gain 335m，但根据大比例尺等topo
map(contour map)可以看出，或许还有好几个hill需要over and down，实际爬升总量可
能会超过600m。在行动之前大致计算总的爬升高度尽量做到心中有数。
坡度路况饮水：
一般的dayhike行进距离约在20km左右,负重8kg左右，坡度路况可以从topo map上查看。
坡度陡峭的路段集中的trail，对体力和经验是有一定要求的。hiking时身体正在承受超
乎平常的新陈代谢，应该刻意地增加饮水量，清水是最好的选择，含糖的饮料不推荐在运
动中途饮用(因为身体需要付出额外的能量去吸收糖份)，越高温和越高难度的路程，排尿
会越少。大小解要离trail和水源尽可能远的地方就地方便，如果想要“出恭”，要挖坑
并事后掩埋掉-:)
地图／信息： |
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m***e
发帖数: 991 | 10 这么好，田螺姑娘有木有！
我觉得还是应该上一门系统的backpacking之类的课，不能老是总结经验教训但是没有
进步。光是读懂等高线地图，然后在脑中把实际地形和topo图（navigate and
visualize the real terrain from the topo lines)联系起来就够我琢磨好一阵的了。
推荐你一本杂志吧-“backpacker”，最近学了一点点东西都是从那上面来的。当然理
论转化为实践还是需要相当长时间滴。 |
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I*****y
发帖数: 6402 | 11 ☆─────────────────────────────────────☆
baboben (baboben) 于 (Fri Nov 18 15:06:32 2011, 美东) 提到:
打电话过去想核实一下地址和营业时间。还没等我开口，人家说：是order吗？不是的
话，我现在很忙。然后就挂了。。。
独留我一人在电话这头空悲叹。。。
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molle (SimpleMolle) 于 (Fri Nov 18 15:15:24 2011, 美东) 提到:
赞典型中国式服务态度！
顺道pat一小下。。。
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maywhite (梅逐雨中黄) 于 (Fri Nov 18 15:30:18 2011, 美东) 提到:
你试试用英语问他们，估计就巨耐心的给你说好几遍，不过这样的中国
餐馆不去也罢 。
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baboben (babobe... 阅读全帖 |
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l*****a
发帖数: 14 | 12 经过和小孩同学仔细研究，credit to 小孩同学
研究出来了trail head，localhikes那里说得比较混乱
但是topo图比较清晰，trail head在 colby canyon trail head
210 angeles forest hwy下，一直往北走，过了那个三叉路继续往前
过了clear creek station往东大约0.7mile
一会我贴几个screen shot上来
小孩同学还买了那一带的topo图，确认了那个地方
集合地点就定在那里
明天我如果无聊了说不定跑过去看一眼 |
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a*****t
发帖数: 184 | 13 谢拉 到今天才发现localhikes旁边那些图标是可以点的
那边也有topo的 害我以前都一直在找trail的topo |
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t**********p
发帖数: 2672 | 14 现在经济不好， 很难逃票了， 大家记得带钱做tram下山，12.5 one-way。
topo maps
skyline trail topo map
upper tram station to the peak |
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h******d
发帖数: 4761 | 15 是给Garmin的吗？
其他牌子我不晓得，我的那个只认本厂的软件。
我有的garmin的地图是1.garmin mapsource us national park topo 24
2.Garmin_topo_usa_2008
3.TOPO U.S. 24K - Mid-Atlantic v2.00
看你需要吧。 |
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G***Y
发帖数: 9698 | 16 纽约生活》4月15日~4月21日
本报讯
April 14, 2013 06:05 AM
【4月15日 星期一】
●致富座谈Learn How to Become Rich Workshop
时间﹕12：30pm
地点﹕曼哈坦Avenue of the Americas 1335号
查询﹕http://www.richdadfreeseminar.com/NewYork/27.0000/index.dtm?MID=2827476
门票﹕免费。纽约是全世界的金融之都，财富集中也让如何理财成了纽约民眾最关心的
话题。凭藉撰写「富爸爸，穷爸爸」(Rich Dad, Poor Dad)等理财丛书及演讲躋身富翁
的罗勃特．清崎(Robert Kiyosaki)将在纽约举办讲座，如何理财和大家分享如果保持
现金流、房地產理财、风险管理更投资理念，将「富爸爸，穷爸爸」中的理论变成实践。
●Muse演唱会
时间：8pm
地点﹕麦迪逊广场花园，曼哈坦中城宾州广场2号
查询﹕www.thegarden.com/events/2013/april/muse-at-madison-square-garden.... 阅读全帖 |
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y****e
发帖数: 1785 | 17 唉，这个事情真是蹊跷，路过wave几次都没等到walkin pass，但是那个trail应该很简单
至于hiking应该注意什么，看来不少人都有误区，hiking没那么可怕，但是一定要有基
本的知识。比如如果不是维护很好的trail，需要自己找路的，一定要事先自己看好
topo map，同时记住GPS只是辅助导航，指南针和地图则是最基本的，学会看topo map
对于大家来说不难。一定要记住10 essentials，而我发现很多国人是不带first aid
kit和fire starter的。
1. Map
2. Compass (optionally supplemented with a GPS receiver)
3. Sunglasses and sunscreen
4. Extra food and water
5. Extra clothes
6. Headlamp/flashlight
7. First aid kit
8. Fire starter
9. Matches
10. Knife |
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m*******n
发帖数: 5103 | 18 给楼主一个好玩的东东：
底下这图是 Pine Lake 的 topo map 叠在卫星图上。从卫星图上可以明显看到湖边钓
客所站的码头，而 topo map 上可以看出整个湖最深的山谷是 35 尺深，就在码头前方
不远处。所以你可以让你老爹看看他该站在哪里，朝哪里抛线。
好啦，码了那么多字，没有个十个八个包子不好意思了吧？ |
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j***a
发帖数: 10844 | 19 Hiking and Backpacking Gear and Tips
I've gotten several e-mails about what gear is necessary for hiking and
backpacking. There are 100s of vendors out there selling different qualities
of gear at different prices. To try to evaluate them all here is impossible
and beyond the scope of this website. Instead I've chosen to list the most
important items you'll need and what features to look for and avoid. I
strongly recommend visiting one of the many on-line outfitters and doing
some comparison sho... 阅读全帖 |
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w********6
发帖数: 12977 | 20 【 以下文字转载自 Outdoors 讨论区 】
发信人: wolfstar76 (天狼星), 信区: Outdoors
标 题: Garmin 60csx 貌似每次只能有一个地图啊
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jun 4 19:35:11 2010, 美东)
花了几个小时在我的8gb的microSD上传了Garmin Topo US 2008, Garmin City
Navigator
2010, Garmin National Park West 24k Topo, 结果发现我做了无用功，一个个都覆盖
了，原
来SD卡里面只能有一个地图。 |
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b**s
发帖数: 4571 | 22 我用的是和nightrunner一样的 garmin vista HCX. 大致功能和你的可能都差不多。
要买后面带HCX标志的型号，可以插micro SD 卡，自己load topo map, 否则就是base
map。有些型号卖的很贵，可能就是因为build in了topo map。 |
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f********t
发帖数: 4574 | 23 确实是这样，雪地white out只能按方向走的。
我们的GPS都有Compass+Topo Map，传统的Compass+Topo Map也带了。 |
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S********t
发帖数: 18987 | 24 你们本来就没打算按TRAIL走吧, 看TOPO上没什么不对,和TOPO上标的TRAIL是重合的
就是个参照 |
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p*****o
发帖数: 1285 | 25 If you have uploaded CNNA together with TOPO map, the CNNA map will be
displayed. You have to disable the CNNA (or other maps) on your unit in
order to see the topo map. |
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d**r
发帖数: 352 | 26 LA的Walmart在清Magellan Triton 400 GPS value pack。$90+tax。
包装里有gps、电池、套子、national geographic的US TOPO map。
另外，现在可以从magellan网站免费下TOPO USA (不同于国家地理）。
REI现在是$120。应该只有GPS。
http://www.rei.com/product/763225 |
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s********e
发帖数: 814 | 27 我装的是某人自制的50m topo
问题是，现在又需要换回美国topo了。。。 |
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s********e
发帖数: 814 | 28 google: garmin sater garmin
应该能找到这个sater做的中文firmwire，需要刷机，然后再装对应的中文topo地图。
年初最新的是50m topo
村一级的坐标也都有 |
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a**u
发帖数: 492 | 29 topo or city?
topo如果是中文，有转成pinyin的工具，需要重新编译地图
city需要下非官方纠偏的地球坐标地图 |
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s**********s
发帖数: 7387 | 30 get a military compass and learn how to pinpoint your location with a topo
map. still, a GPS with 24k hi-res topo map is a great tool. |
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w********6
发帖数: 12977 | 31 花了几个小时在我的8gb的microSD上传了Garmin Topo US 2008, Garmin City
Navigator
2010, Garmin National Park West 24k Topo, 结果发现我做了无用功，一个个都覆盖
了，原
来SD卡里面只能有一个地图。 |
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c*****g
发帖数: 849 | 32 啥软件可以把topo maps接起来？
怎么弄到画trail的topo map? 没有trail还是觉得不方便。 |
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p**********t
发帖数: 2636 | 33 Day 2. Nutcracker (5-pitch 5.8)。之所以经典，这条线有5.8 lieback, 5.8
friction slab (slightly runout), 5.8 roof, and a committed 5.8 bouldary
mantle move。Crux的mantle如果fall的话下面是个小斜坡，好些人这里摔坏了脚踝。
还是比较serious的一条5.8路线。
pitch 1. 5.7 lieback + 5.8 lieback。照片是我在lead 5.8 lieback的部分
pitch 2. 5.4 Qun基本是走上去的，都没怎么放pro
pitch 3. 5.7 这是我爬过的最难的5.7了，sustained + slippery。Great lead, Qun!
pitch 4. 5.8 Crux的5.8 friction slab我一开始还走错了，down climb下来。topo上的
piton很隐蔽，我走过了回头才发现的。这个pitch很长，zigzag，又sustained，我后
来把gear和
sling全用完了，在离topo |
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c******n
发帖数: 16403 | 34 gpsfiledepot上下载的加州24k topo和garmin自己卖的24k topo有什么区别吗？ |
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r******h
发帖数: 809 | 35 【 以下文字转载自 Travel 讨论区 】
发信人: rotatezh (剃度在莲台下), 信区: Travel
标 题: 美西南石头记(7)——The wave plus
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Apr 4 19:26:53 2012, 美东)
昨天跑了一趟之后，今天再去The wave的TH已是轻车熟路。我们到的时候是第二辆车，
边上两个国内来旅游的年轻夫妻正准备出发。和昨天的艳阳高照相比，今天是真冷，风
呼呼的。我们都穿着羽绒服，紧紧地裹着帽子；我把许可证挂在背包顶带的拉链上，许
可证一路被风吹得直扇我耳朵，疼... 不知道BLM是不是因为收到了很多抱怨，新版的
地图加上了返程的6张照片，一共有12张了。每张照片都辅以文字说明、GPS和bearing
，最好用的其实还是bearing，站在一个点，顺着bearing所指方向目所能及的最远处就
是下一个点，跟照片对起来很是吻合。
离开停车场后，穿过马路，就是trail的起点。BLM的地图说明第一段路是顺着山坡上的
小径、穿过一道铁门、下到山坡另一侧的washout上，其实从入口处沿着washout绕过山
坡也可... 阅读全帖 |
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a***n
发帖数: 584 | 36 先此声明。我不单只是打酱油的，而且我在上个月之前从来没在野外做背包客。所以，
各位大牛小侠，请放心使劲拍。哈哈~~
第一步：做功课
上个月，找了两个周末做背包客。做功课的时候，在这里一时找不到介绍经验的帖子。
所以我就在此抛砖引玉。
1。背包露营，不难
一位大侠和我说过：背包露营没什么特殊之处，有露营和登山的经验，就行。仔细想想
，普通的周末背包露营，真没别的。当然，冬季的，长途的，不在此类。
2。要做什么功课
路线： 路线的名称，标志，海拔的增减，难度，其他人的TR（trail report)
天气： 出发前三天再看看。高低气温，风速，雷阵雨的可能性
计划： 基本预算（多少水，多长的路，多少时间，如果提前下来，怎么办），停车位
营区： 附近的水源，有没有熊/狼/豺之类的动物
突发情况：找一些/想一想突发情况的FAQ (常见问题）
基本知识：例如知道怎样使用背包里全部东西（如果不知道怎么用，就别带）
找资料，中文的，我会在这版上搜一下，发帖子问。英文的，去图书馆，去网站（例如
，rei.com) ，在网上搜索。
第二步：装备
每一样用品都有不少讲究。这里只是列举一个清单。
1。... 阅读全帖 |
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r******h
发帖数: 809 | 37 昨天跑了一趟之后，今天再去The wave的TH已是轻车熟路。我们到的时候是第二辆车，
边上两个国内来旅游的年轻夫妻正准备出发。和昨天的艳阳高照相比，今天是真冷，风
呼呼的。我们都穿着羽绒服，紧紧地裹着帽子；我把许可证挂在背包顶带的拉链上，许
可证一路被风吹得直扇我耳朵，疼... 不知道BLM是不是因为收到了很多抱怨，新版的
地图加上了返程的6张照片，一共有12张了。每张照片都辅以文字说明、GPS和bearing
，最好用的其实还是bearing，站在一个点，顺着bearing所指方向目所能及的最远处就
是下一个点，跟照片对起来很是吻合。
离开停车场后，穿过马路，就是trail的起点。BLM的地图说明第一段路是顺着山坡上的
小径、穿过一道铁门、下到山坡另一侧的washout上，其实从入口处沿着washout绕过山
坡也可以，差不了几分钟。沿着washout走一段之后，看到一个向右的分叉，叉路口上
有permit area的标记，严格来说过了这里才是一天20个permit的保护区。顺着岔路走
上右边的矮山，都是细碎的沙子路，很新鲜的脚印，应该是我们之前那对年轻夫妻的。
左边近处的一座小土... 阅读全帖 |
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s***e
发帖数: 911 | 38 这里系统指溶液中DNA分子的集合.
我们的模型里面, ATP用来驱动Proofreading, 也就是那个激发TOPO
II的不可逆过程.
另外一个ATP的能量用来驱动DNA的输运不可逆过程. 这些外加的能量分成两个部分:
一部分用来驱动反应过程中TOPO II的位形变化, 其它的部分就导致DNA拓扑分布
偏离平衡态. 我这里对它们作个估计.
设共有N个DNA分子, 有N1个在e1能级, N2个在e2能级, N=N1+N2.其中e1是Unknot
构型的分子能级, e2是Knot构型的分子能级. 我这里用了双能级近似, 是因为在
众多的可能不同的Knot中, 绝大部分都是所谓3-扭结(Trefoil).
那么在热力学平衡态下, 分子能级分布满足Boltzmann分布:
N1/N=c*Exp[-e1/(Kb*T)];
N2/N=c*Exp[-e2/(Kb*T)];
其中Kb是Boltzmann常数.
平衡态分布的Fraction, 对97年实验的实验条件和分子长度来说:
F_eq=N2/N1=0.02=>N1=N/(1+F_eq)
由此推知
e2-e1=4 (Kb*T)
这样我们就得到了 |
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a**********s
发帖数: 238 | 39 这种情况我以前也遇到过，后来发现把转化时42度热击的时间从30秒延长到45-50秒就
基本解决了。大片段的插入片段在热击时如果时间不够长的话，就会发生missing部分
片段的情况，推测可能是部分末端的DNA来不及进入E.coli。
BTW：你是不是在用TOPO载体？TOPO对于3kb以下的插入片段好像还稳定，大于3kb的片
段就经常出问题，至少在我手上。我后来换了Promega的T-vector就一直很稳定。 |
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x**2
发帖数: 255 | 40 谢谢回复～
我的片段1确实是在TOPO里，
我的正向primer含EcoR1位点和6个保护碱基，反向pcr primer含Nhe1和6个保护碱基。扩出的片段末端加A后连到TOPO上。
这样会有问题么？
或者我把片段1前面的酶切位点改成BssHII？这样就和片段4的酶切位点一样了。
谢谢～ |
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C*******e
发帖数: 4348 | 41 碱基保护在数量上
具体什么碱基应该是没有关系的
因为所谓“限制性酶切位点”就已经决定了除开这个识别位点以外、
上游或者下游的序列跟酶切无关
加几个碱基作为“保护”还是可以从名称上想明白为什么
“限制性内切酶”
所谓“内切”
而不是在末端切
就决定了当我们人为的把酶切位点设计在引物末端的时候需要再
加几个碱基以保证可以切得动
除非你不是直接切PCR产物
而是用TA cloning或者TOPO-Blunt end cloning先把PCR产
物放到TA/TOPO vector里面了 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 42 哪个TOPO vector？他们家好几个叫TOPO的
有的是两个方向都有可能insert的 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 43 TOPO的那个是偏低
PCR是新鲜的
TOPO kit倒是放了有大半年了 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 44 个人觉得TA clone不咋好用
TOPO blunt end很好用，注意要买II，不是I，I还是要用ligase的
TOPO blunt end II就是PCR产物直接跟vector室温混半小时
然后transfer |
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l**********1
发帖数: 5204 | 45 RE:
not expensive blunt TOPO
but alternatively you can try
another ligation-anchored PCR protocol:
details just go to
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31517723.html
2F
from our experience even over 7.5kbp with a very longer 3' UTR mRNA (for
alternative splicing functions
possible) can be full cloned its ORF plus 5' UTR and near 3' UTR (3kbp)
then TA sub cloning
with TOPO TA kit:
htp://products.invitrogen.com/ivgn/product/K450001
Taq |
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l**********1
发帖数: 5204 | 46 LZ pls try
XL-TOPO@ zero blunt kit
3kbp < insert size < 10 kbp
//www.invitrogen.com/1/1/17320-topo-xl-pcr-cloning-kit.html
and
//www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/
Cloning/PCR-cloning.html
original hint was from
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31695611.html
3th floor |
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x**e
发帖数: 163 | 47 3k多的片段，合成的话应该很贵吧。
一起就10来个ng的产物，也试过上TOPO，因为酶切位点的保护碱基就用的cacc，用的买
的感受态，上不去，怀疑TOPO自身只有2.6k，装不下3k的东西 |
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