从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（十三） - Biology版

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Biology版 - 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（十三）

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r****o
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本文献给YL
（十三）装柱子的学问。
　上篇提到了Gel filtration的基本原理，现在谈谈我装柱子的过程。我们用的是Amersham
的 XK26/40的空柱子，然后往里面填充Sephacryl S-300 HR 的resin。按道理说，要提高分辨
率，柱子应该是越长越细才好，这种柱子虽然不短，但是挺粗的。但是一个好处就是，样品体
积可以大一些。
装柱子本身就是一件很tricky的事情，以至与这课的教程上专门列了一小节来解释怎么装
柱子。我们这一组人中，我负责装柱子。一开始就是洗resin了，用粗制烧结玻板过滤的漏斗来
洗，感觉这方法还挺快的。洗完了，就把resin重悬成50%的slurry，然后就是往柱子里头倒了。
但是呢，有一个小窍门，就是必须先封闭柱子的下出口，往柱子里面倒10%体积的buffer。我
过去装柱子犯傻，不知道要这么做，结果发现下面的resin 不均匀不说，还有一大堆气泡。所以
先加buffer是很必要的。倒slurry的时候还得用玻棒引流，这样可以尽可能的避免气泡。然后就
是等了，等resin 沉降３０分钟后，就可以打开柱子的下出液口，让多余

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