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r****o
发帖数: 105
1
本文献给YL
(十三)装柱子的学问。
上篇提到了Gel filtration的基本原理,现在谈谈我装柱子的过程。我们用的是Amersham
的 XK26/40的空柱子,然后往里面填充Sephacryl S-300 HR 的resin。按道理说,要提高分辨
率,柱子应该是越长越细才好,这种柱子虽然不短,但是挺粗的。但是一个好处就是,样品体
积可以大一些。
装柱子本身就是一件很tricky的事情,以至与这课的教程上专门列了一小节来解释怎么装
柱子。我们这一组人中,我负责装柱子。一开始就是洗resin了,用粗制烧结玻板过滤的漏斗来
洗,感觉这方法还挺快的。洗完了,就把resin重悬成50%的slurry,然后就是往柱子里头倒了。
但是呢,有一个小窍门,就是必须先封闭柱子的下出口,往柱子里面倒10%体积的buffer。我
过去装柱子犯傻,不知道要这么做,结果发现下面的resin 不均匀不说,还有一大堆气泡。所以
先加buffer是很必要的。倒slurry的时候还得用玻棒引流,这样可以尽可能的避免气泡。然后就
是等了,等resin 沉降30分钟后,就可以打开柱子的下出液口,让多余
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