【虎年吉祥】请教牛人们克隆问题！ - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 【虎年吉祥】请教牛人们克隆问题！

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q*****d 发帖数: 445	1 Plasmid pYD1-CipA1(3)-EGII was obtained by cotransforming G10A1-HR1, G10A1- HR2,G10A1-HR3, G10A1-HR4, HisG-EGII, and DrdI/NheI-digested pYD1- CipA1(3) into EBY100. All plasmids were purified from S. cerevisiae and thentransformed into DH5a, recovered, and confirmed by DNA sequencing. 以上是我在一篇文章里找到的句子，有两个问题不明白，特来请教： 1.这是不是一种多片段克隆的方法，他是把vector和n个要插入的片段纯化之后不用连接酶直接转化大肠，这种方法成功率如何？多少个片段都可以吗？ 2.他的质粒纯化怎么用酵母呢，有什么优点吗？谢谢大家，因为我有一堆克隆要做，急需要多片段克隆的方法，一个载体有14个片段要插入！
h**********r 发帖数: 671	2 酵母自己有这样的重组系统，只要片段之间有足够的overlap就可以了。这个叫cloning by homologous recombination in Saccharomyces cerevisiae 可以看看这个paper，DNA assembler, an in vivo genetic method for rapid construction of biochemical pathways P.S You need a specific strain and plasmid. Go to http://www.fgsc.net/gpkit.html and order FGSC 9721 and pRS426. (FGSC菌株最便宜) You can follow the knockout protocol to create a long piece of DNA in yeast through homologous recombination. http://www.dartmouth.edu/~neurosporagenome/knockout_cassettes.
q*****d 发帖数: 445	3 太感谢了，这个方法是实在太方便了

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