g*****y 发帖数: 6325 | 1 我把这个pET27b(+) empty vector 和 inserted vector 转入xl-10之后不论是
miniprep(2ml culture)还是midi(50ml
culture), DNA产量都很低。 而且260/230也是总是不到2.0, 请问有经验的大虾可以
帮我分析以下吗? |
s******r 发帖数: 2876 | 2 这是low copu number plasmid,
可以参考qiagen的kit manual.
我把这个pET27b(+) empty vector 和 inserted vector 转入xl-10之后不论是
miniprep(2ml culture)还是midi(50ml
culture), DNA产量都很低。 而且260/230也是总是不到2.0, 请问有经验的大虾可以
帮我分析以下吗?
【在 g*****y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我把这个pET27b(+) empty vector 和 inserted vector 转入xl-10之后不论是 : miniprep(2ml culture)还是midi(50ml : culture), DNA产量都很低。 而且260/230也是总是不到2.0, 请问有经验的大虾可以 : 帮我分析以下吗?
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g*****y 发帖数: 6325 | 3 是吗? 网上明明写的pET27(b)是high copy plasmid... 我用过 pGEMEM-1 和 pET27b(
+)都是用的pBR322 origin. 为什
么我的pGEMEM-1 产量就很高呢? 还有为什么260/230总是这么低呢?
【在 s******r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 这是low copu number plasmid, : 可以参考qiagen的kit manual. : : 我把这个pET27b(+) empty vector 和 inserted vector 转入xl-10之后不论是 : miniprep(2ml culture)还是midi(50ml : culture), DNA产量都很低。 而且260/230也是总是不到2.0, 请问有经验的大虾可以 : 帮我分析以下吗?
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D**4 发帖数: 76 | 4 sinister说的对,我以前做过pET28是low copy plasmid, 我猜pET27应该差不多。
pET27b(
【在 g*****y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 是吗? 网上明明写的pET27(b)是high copy plasmid... 我用过 pGEMEM-1 和 pET27b( : +)都是用的pBR322 origin. 为什 : 么我的pGEMEM-1 产量就很高呢? 还有为什么260/230总是这么低呢?
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g*****y 发帖数: 6325 | 5 是这样啊。 谢谢回答。 可以说说为什么每次pET27b(+)dna的260/230都低于2吗? 一
起做的其他vector都很好。
请问如果我要表达蛋白是用pet27b好呢,还是pGEMEX-1 好呢?
【在 D**4 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : sinister说的对,我以前做过pET28是low copy plasmid, 我猜pET27应该差不多。 : : pET27b(
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j*********n 发帖数: 168 | 6 我们表达蛋白用的载体,一般不测260/230啊,基本用nanodrop,都是显示绿色,应该
就是合格吧。
表达蛋白可以用的载体很多,没法说哪个更好吧?
能得到目的蛋白,易于纯化就行,我是这么觉得的。
有很多做方法学出身的,都用好多个载体表达同一个蛋白,再对诱导条件进行优化。
【在 g*****y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 是这样啊。 谢谢回答。 可以说说为什么每次pET27b(+)dna的260/230都低于2吗? 一 : 起做的其他vector都很好。 : 请问如果我要表达蛋白是用pet27b好呢,还是pGEMEX-1 好呢?
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g*****y 发帖数: 6325 | 7 我說得是miniprep DNA的260/230总是低于2。.
【在 j*********n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我们表达蛋白用的载体,一般不测260/230啊,基本用nanodrop,都是显示绿色,应该 : 就是合格吧。 : 表达蛋白可以用的载体很多,没法说哪个更好吧? : 能得到目的蛋白,易于纯化就行,我是这么觉得的。 : 有很多做方法学出身的,都用好多个载体表达同一个蛋白,再对诱导条件进行优化。
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