g*****y
发帖数: 6325 | 1 我把这个pET27b(+) empty vector 和 inserted vector 转入xl-10之后不论是
miniprep(2ml culture)还是midi(50ml
culture), DNA产量都很低。 而且260/230也是总是不到2.0， 请问有经验的大虾可以
帮我分析以下吗？ |
s******r
发帖数: 2876 | 2 这是low copu number plasmid，
可以参考qiagen的kit manual.
我把这个pET27b(+) empty vector 和 inserted vector 转入xl-10之后不论是
miniprep(2ml culture)还是midi(50ml
culture), DNA产量都很低。 而且260/230也是总是不到2.0， 请问有经验的大虾可以
帮我分析以下吗？
【在 g*****y 的大作中提到】
: 我把这个pET27b(+) empty vector 和 inserted vector 转入xl-10之后不论是
: miniprep(2ml culture)还是midi(50ml
: culture), DNA产量都很低。 而且260/230也是总是不到2.0， 请问有经验的大虾可以
: 帮我分析以下吗？
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g*****y
发帖数: 6325 | 3 是吗？ 网上明明写的pET27(b)是high copy plasmid... 我用过 pGEMEM-1 和 pET27b(
+)都是用的pBR322 origin. 为什
么我的pGEMEM-1 产量就很高呢？ 还有为什么260/230总是这么低呢？
【在 s******r 的大作中提到】
: 这是low copu number plasmid，
: 可以参考qiagen的kit manual.
:
: 我把这个pET27b(+) empty vector 和 inserted vector 转入xl-10之后不论是
: miniprep(2ml culture)还是midi(50ml
: culture), DNA产量都很低。 而且260/230也是总是不到2.0， 请问有经验的大虾可以
: 帮我分析以下吗？
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D**4
发帖数: 76 | 4 sinister说的对，我以前做过pET28是low copy plasmid, 我猜pET27应该差不多。
pET27b(
【在 g*****y 的大作中提到】
: 是吗？ 网上明明写的pET27(b)是high copy plasmid... 我用过 pGEMEM-1 和 pET27b(
: +)都是用的pBR322 origin. 为什
: 么我的pGEMEM-1 产量就很高呢？ 还有为什么260/230总是这么低呢？
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g*****y
发帖数: 6325 | 5 是这样啊。 谢谢回答。 可以说说为什么每次pET27b(+)dna的260/230都低于2吗？ 一
起做的其他vector都很好。
请问如果我要表达蛋白是用pet27b好呢，还是pGEMEX-1 好呢？
【在 D**4 的大作中提到】
: sinister说的对，我以前做过pET28是low copy plasmid, 我猜pET27应该差不多。
:
: pET27b(
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j*********n
发帖数: 168 | 6 我们表达蛋白用的载体，一般不测260/230啊，基本用nanodrop，都是显示绿色，应该
就是合格吧。
表达蛋白可以用的载体很多，没法说哪个更好吧？
能得到目的蛋白，易于纯化就行，我是这么觉得的。
有很多做方法学出身的，都用好多个载体表达同一个蛋白，再对诱导条件进行优化。
【在 g*****y 的大作中提到】
: 是这样啊。 谢谢回答。 可以说说为什么每次pET27b(+)dna的260/230都低于2吗？ 一
: 起做的其他vector都很好。
: 请问如果我要表达蛋白是用pet27b好呢，还是pGEMEX-1 好呢？
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g*****y
发帖数: 6325 | 7 我說得是miniprep DNA的260/230总是低于2。.
【在 j*********n 的大作中提到】
: 我们表达蛋白用的载体，一般不测260/230啊，基本用nanodrop，都是显示绿色，应该
: 就是合格吧。
: 表达蛋白可以用的载体很多，没法说哪个更好吧？
: 能得到目的蛋白，易于纯化就行，我是这么觉得的。
: 有很多做方法学出身的，都用好多个载体表达同一个蛋白，再对诱导条件进行优化。
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