c***y
发帖数: 615 | 1 想检测一段DNA序列 (3'端)是否有降低基因转录的功能。大家一般是怎么个思路？
初步想克隆这段DNA到 luciferase 载体的3'端,看是否影响luciferase的表达.问题是,
选择什么样的promoter呢.担心太强的,看不出效果;太弱的话,可能根本不表达
还有, GFP作reporter 会更好吗? 与luciferase相比,哪一个更敏感些?
多谢... | c***y
发帖数: 615 | 2 自己顶一下。
难道没人有这方面的经验吗？
是,
【在 c***y 的大作中提到】
: 想检测一段DNA序列 (3'端)是否有降低基因转录的功能。大家一般是怎么个思路？
: 初步想克隆这段DNA到 luciferase 载体的3'端,看是否影响luciferase的表达.问题是,
: 选择什么样的promoter呢.担心太强的,看不出效果;太弱的话,可能根本不表达
: 还有, GFP作reporter 会更好吗? 与luciferase相比,哪一个更敏感些?
: 多谢...
| D*********t
发帖数: 370 | 3 Just fuse the 3' end to luciferase (more sensitive than GFP). Start with
whatever promoter you have in your plasmid (CMV, etc).
是,
【在 c***y 的大作中提到】
: 想检测一段DNA序列 (3'端)是否有降低基因转录的功能。大家一般是怎么个思路？
: 初步想克隆这段DNA到 luciferase 载体的3'端,看是否影响luciferase的表达.问题是,
: 选择什么样的promoter呢.担心太强的,看不出效果;太弱的话,可能根本不表达
: 还有, GFP作reporter 会更好吗? 与luciferase相比,哪一个更敏感些?
: 多谢...
| c***y
发帖数: 615 | 4 Thank you for the reply.
I am always wondering if I would miss the detection of luciferase due to its
short half-time.
I don't have a lot of experience with reporter assay, really want to hear
more.
【在 D*********t 的大作中提到】
: Just fuse the 3' end to luciferase (more sensitive than GFP). Start with
: whatever promoter you have in your plasmid (CMV, etc).
:
: 是,
| h**********8
发帖数: 650 | 5 sv40
pRosa
EF........
of course luciferase, since it is quantified.
是,
【在 c***y 的大作中提到】
: 想检测一段DNA序列 (3'端)是否有降低基因转录的功能。大家一般是怎么个思路？
: 初步想克隆这段DNA到 luciferase 载体的3'端,看是否影响luciferase的表达.问题是,
: 选择什么样的promoter呢.担心太强的,看不出效果;太弱的话,可能根本不表达
: 还有, GFP作reporter 会更好吗? 与luciferase相比,哪一个更敏感些?
: 多谢...
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