j***a 发帖数: 2 | 1 这里EMSA 高手很多,请大家帮忙看看
用一段PROMOTER 序列(200bp) 做probe, 能binding 到体外转录的蛋白上,但背景比
较高然后用两个片段来做probe, 有一段能binding, 。奇怪的是,当把这个片段再弄成
两段(直接合成PRIMER, ANNEAL)就没有binding了,难道是这个binding 需要二级结构
? | m**z 发帖数: 787 | 2 弄成2段是什么意思,一分为二?100bp+100bp,然后50bp+50bp? 这样的话你可能把
binding site拆成2段了,当然不会bind
【在 j***a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 这里EMSA 高手很多,请大家帮忙看看 : 用一段PROMOTER 序列(200bp) 做probe, 能binding 到体外转录的蛋白上,但背景比 : 较高然后用两个片段来做probe, 有一段能binding, 。奇怪的是,当把这个片段再弄成 : 两段(直接合成PRIMER, ANNEAL)就没有binding了,难道是这个binding 需要二级结构 : ?
| T**********t 发帖数: 1604 | 3 核酸和蛋白的binding应该都需要二级结构吧。会bind特定的序列其实是因为这个特定
的序列会有特定的二级结构啊。 | j***a 发帖数: 2 | 4 不好意思,没有表达清楚。不是100 +100, 有10个重叠碱基的
【在 m**z 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 弄成2段是什么意思,一分为二?100bp+100bp,然后50bp+50bp? 这样的话你可能把 : binding site拆成2段了,当然不会bind
| m**z 发帖数: 787 | 5 only 10bp overlap may be to little... a serious DNA with probably 50-60 bp
overlap may be necessary depending on the length of the specific binding
site on DNA
【在 j***a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 不好意思,没有表达清楚。不是100 +100, 有10个重叠碱基的
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