t*******k
发帖数: 87 | 1 这几天总是遇到一个问题，想请教一下。
做western，同样的样品上两遍，转膜后切开，分别用抗体A和B杂交，信号挺好。实验
需要，将B抗体探测过的膜再次用A抗体杂交，中间无stripping，结果和同样样品直接
用A抗体大不相同，信号几乎完全丢失，是怎末回事呢？蛋白在膜上降解了吗？有人遇
到同样的问题吗？ |
w******e
发帖数: 1187 | 2 A and B don't bind to the same target, do they?
【在 t*******k 的大作中提到】
: 这几天总是遇到一个问题，想请教一下。
: 做western，同样的样品上两遍，转膜后切开，分别用抗体A和B杂交，信号挺好。实验
: 需要，将B抗体探测过的膜再次用A抗体杂交，中间无stripping，结果和同样样品直接
: 用A抗体大不相同，信号几乎完全丢失，是怎末回事呢？蛋白在膜上降解了吗？有人遇
: 到同样的问题吗？
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z****i
发帖数: 35 | 3 弱问，什么实验需要“将B抗体探测过的膜再次用A抗体杂交”？ |
T**********t
发帖数: 1604 | 4 虽然我没啥经验，但是我觉得有可能A抗体和B抗体的结合位点有可能重合或者太接近，
这样蛋白结合了B抗体之后就没法再跟A抗体结合，相当于你用B抗体把A的结合位点都
block上了。我乱说的啊，行家看了不要笑话我。 |
t*******k
发帖数: 87 | |
C*******e
发帖数: 4348 | 6 抗体A和抗体B的来源不同不代表它们识别的不是同一个target啊
（你文中就说“蛋白样品”，没有说抗体A和抗体B是不是识别同一个抗原）
【在 t*******k 的大作中提到】
: 事实上 A/B大小 完全没有重合
: 而且来源不同
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x****e
发帖数: 53 | 7 大概就是steric hindrance 吧， 先 A 后 B 試試 |
