t*******k 发帖数: 87 | 1 这几天总是遇到一个问题,想请教一下。
做western,同样的样品上两遍,转膜后切开,分别用抗体A和B杂交,信号挺好。实验
需要,将B抗体探测过的膜再次用A抗体杂交,中间无stripping,结果和同样样品直接
用A抗体大不相同,信号几乎完全丢失,是怎末回事呢?蛋白在膜上降解了吗?有人遇
到同样的问题吗? |
w******e 发帖数: 1187 | 2 A and B don't bind to the same target, do they?
【在 t*******k 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 这几天总是遇到一个问题,想请教一下。 : 做western,同样的样品上两遍,转膜后切开,分别用抗体A和B杂交,信号挺好。实验 : 需要,将B抗体探测过的膜再次用A抗体杂交,中间无stripping,结果和同样样品直接 : 用A抗体大不相同,信号几乎完全丢失,是怎末回事呢?蛋白在膜上降解了吗?有人遇 : 到同样的问题吗?
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z****i 发帖数: 35 | 3 弱问,什么实验需要“将B抗体探测过的膜再次用A抗体杂交”? |
T**********t 发帖数: 1604 | 4 虽然我没啥经验,但是我觉得有可能A抗体和B抗体的结合位点有可能重合或者太接近,
这样蛋白结合了B抗体之后就没法再跟A抗体结合,相当于你用B抗体把A的结合位点都
block上了。我乱说的啊,行家看了不要笑话我。 |
t*******k 发帖数: 87 | |
C*******e 发帖数: 4348 | 6 抗体A和抗体B的来源不同不代表它们识别的不是同一个target啊
(你文中就说“蛋白样品”,没有说抗体A和抗体B是不是识别同一个抗原)
【在 t*******k 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 事实上 A/B大小 完全没有重合 : 而且来源不同
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x****e 发帖数: 53 | 7 大概就是steric hindrance 吧, 先 A 后 B 試試 |