w*****r
发帖数: 2061 | 1 是不是G418只能筛选HEK 293？HEK 293T自带G418抗性？
多谢 |
s******y
发帖数: 28562 | 2 HEK 293T 本身不带G418 抗性。
但是因为 293T可以不停的复制环状的质粒，所以不管是否稳定转染，都会有抗性，
会导致你很难筛选出被稳定转染的细胞。
【在 w*****r 的大作中提到】
: 是不是G418只能筛选HEK 293？HEK 293T自带G418抗性？
: 多谢
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H*****e
发帖数: 120 | 3 Also asking:
Can 293T cells stably infected by one retro- or lenti-virus produce virus if
transfected with the packing system again? |
r***e
发帖数: 2539 | 4 如果你的问题是：一个已经整合了lenti-vector的293T细胞，再转进packaging mix，能
不能自己produce virus?
这个肯定不行的。你仔细看下lenti vector的结构就知道了，vector是有external pro
moter能转录整个viral RNA，而整合以后的片段不行。这也是safety的设计， 在第三代
lenti viral vector的LTR自己没有转录活性了，叫做self inactivated。
if
【在 H*****e 的大作中提到】
: Also asking:
: Can 293T cells stably infected by one retro- or lenti-virus produce virus if
: transfected with the packing system again?
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r***e
发帖数: 2539 | 5 你是说带有sv40 ori的质粒能被T antigen复制吧
？
【在 s******y 的大作中提到】
: HEK 293T 本身不带G418 抗性。
: 但是因为 293T可以不停的复制环状的质粒，所以不管是否稳定转染，都会有抗性，
: 会导致你很难筛选出被稳定转染的细胞。
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s******r
发帖数: 2876 | 6 293T本身应该是G418 resistant，不然它那个大T抗原怎么进去的。
HEK 293T 本身不带G418 抗性。
但是因为 293T可以不停的复制环状的质粒，所以不管是否稳定转染，都会有抗性，
会导致你很难筛选出被稳定转染的细胞。
【在 s******y 的大作中提到】
: HEK 293T 本身不带G418 抗性。
: 但是因为 293T可以不停的复制环状的质粒，所以不管是否稳定转染，都会有抗性，
: 会导致你很难筛选出被稳定转染的细胞。
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s******y
发帖数: 28562 | 7 Oh...I thought it was accidentally made with antigen T by virus infection or
something. Guess I was wrong.
So it was intentionally made by stable transfection?
【在 s******r 的大作中提到】
: 293T本身应该是G418 resistant，不然它那个大T抗原怎么进去的。
:
: HEK 293T 本身不带G418 抗性。
: 但是因为 293T可以不停的复制环状的质粒，所以不管是否稳定转染，都会有抗性，
: 会导致你很难筛选出被稳定转染的细胞。
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