w*****r 发帖数: 2061 | 1 是不是G418只能筛选HEK 293?HEK 293T自带G418抗性?
多谢 |
s******y 发帖数: 28562 | 2 HEK 293T 本身不带G418 抗性。
但是因为 293T可以不停的复制环状的质粒,所以不管是否稳定转染,都会有抗性,
会导致你很难筛选出被稳定转染的细胞。
【在 w*****r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 是不是G418只能筛选HEK 293?HEK 293T自带G418抗性? : 多谢
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H*****e 发帖数: 120 | 3 Also asking:
Can 293T cells stably infected by one retro- or lenti-virus produce virus if
transfected with the packing system again? |
r***e 发帖数: 2539 | 4 如果你的问题是:一个已经整合了lenti-vector的293T细胞,再转进packaging mix,能
不能自己produce virus?
这个肯定不行的。你仔细看下lenti vector的结构就知道了,vector是有external pro
moter能转录整个viral RNA,而整合以后的片段不行。这也是safety的设计, 在第三代
lenti viral vector的LTR自己没有转录活性了,叫做self inactivated。
if
【在 H*****e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : Also asking: : Can 293T cells stably infected by one retro- or lenti-virus produce virus if : transfected with the packing system again?
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r***e 发帖数: 2539 | 5 你是说带有sv40 ori的质粒能被T antigen复制吧
?
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : HEK 293T 本身不带G418 抗性。 : 但是因为 293T可以不停的复制环状的质粒,所以不管是否稳定转染,都会有抗性, : 会导致你很难筛选出被稳定转染的细胞。
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s******r 发帖数: 2876 | 6 293T本身应该是G418 resistant,不然它那个大T抗原怎么进去的。
HEK 293T 本身不带G418 抗性。
但是因为 293T可以不停的复制环状的质粒,所以不管是否稳定转染,都会有抗性,
会导致你很难筛选出被稳定转染的细胞。
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : HEK 293T 本身不带G418 抗性。 : 但是因为 293T可以不停的复制环状的质粒,所以不管是否稳定转染,都会有抗性, : 会导致你很难筛选出被稳定转染的细胞。
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s******y 发帖数: 28562 | 7 Oh...I thought it was accidentally made with antigen T by virus infection or
something. Guess I was wrong.
So it was intentionally made by stable transfection?
【在 s******r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 293T本身应该是G418 resistant,不然它那个大T抗原怎么进去的。 : : HEK 293T 本身不带G418 抗性。 : 但是因为 293T可以不停的复制环状的质粒,所以不管是否稳定转染,都会有抗性, : 会导致你很难筛选出被稳定转染的细胞。
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