M*****n 发帖数: 16729 | |
p******x 发帖数: 1264 | |
M*****n 发帖数: 16729 | 3 不是
转基因
【在 p******x 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 干吗的,作knock in?
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o********r 发帖数: 775 | 4 Good luck,十多年前一个17-18Kb的plasmid就搞掉我半条命 |
p******x 发帖数: 1264 | 5 我还没达到标准,只整过20k左右的单酶切连接。
反正质粒一长,啥star acivity, 转化效率低下的问题都出来了。我觉得最重要的是纯
化要到位,浓度有保证。转化的菌也有关系,热恢复一定要做的。 |
i*****g 发帖数: 11893 | |
M*****n 发帖数: 16729 | 7 俺也是要做单酶切
25kb+3kb
老天保佑。
几年前作过11KB的搞了一个月。
【在 p******x 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我还没达到标准,只整过20k左右的单酶切连接。 : 反正质粒一长,啥star acivity, 转化效率低下的问题都出来了。我觉得最重要的是纯 : 化要到位,浓度有保证。转化的菌也有关系,热恢复一定要做的。
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p******x 发帖数: 1264 | 8
什么样的菌种对15k以上的转化比较好?据我所知dh5 alpha好像不怎么样。但是也能做
出来。
【在 i*****g 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 没有这个经验,要点: 菌株,摇慢点,低温
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M*****n 发帖数: 16729 | 9 invitrogen 最高的效率是电转的DH10B
俺专门买了Bio-rad的电转仪,6000多块,就是为了做这个超大质粒。
【在 p******x 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : : 什么样的菌种对15k以上的转化比较好?据我所知dh5 alpha好像不怎么样。但是也能做 : 出来。
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p******x 发帖数: 1264 | 10
你们实验室试验体系控制得怎么样?碰上某些technician,嘿嘿,板子都要自己做。
【在 M*****n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 俺也是要做单酶切 : 25kb+3kb : 老天保佑。 : 几年前作过11KB的搞了一个月。
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M*****n 发帖数: 16729 | 11 我们都是自己弄的
我们这儿的technician都有自己的project.
【在 p******x 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : : 你们实验室试验体系控制得怎么样?碰上某些technician,嘿嘿,板子都要自己做。
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p******x 发帖数: 1264 | 12 那我感觉还好阿,每一步把好关没准2星期就出来了。没star activity的话会省很多心
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r****o 发帖数: 105 | 13
质粒到了20kb以上就变得不太稳定,尤其是有重复的序列(比如LoxP),有可能会丢
片断,要特别小心。
【在 M*****n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 有做过25-30Kb的质粒的吗?
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