w*********n
发帖数: 439 | 1 本人最近刚开始学作JurkatT细胞的转染.网上有说拿电转的,也有说拿Fugene6转的,请
问有哪位大虾有经验做过转染JurkatT cell,麻烦贴个protocol.多谢了. |
w*********n
发帖数: 439 | |
d***y
发帖数: 299 | 3 electroporation: 1.3 x 107 cells with 10 μg DNA in serum free medium for 10
min and then electroporated the cells using settings of 300
V, 800 μF, and 24 ohms. works well, cheap.
or use amaxa nucleofection. works extremely well. a little bit expensive. |
w*********n
发帖数: 439 | 4 在把1.3X107细胞和DNA混合以后是在冰上放10min？ 电击完了以后是在室温放10min吗？
10
【在 d***y 的大作中提到】
: electroporation: 1.3 x 107 cells with 10 μg DNA in serum free medium for 10
: min and then electroporated the cells using settings of 300
: V, 800 μF, and 24 ohms. works well, cheap.
: or use amaxa nucleofection. works extremely well. a little bit expensive.
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d***y
发帖数: 299 | 5
RT, 1.3X107cell+10ug DNA in 300ul Serum free medium, RT 10 min.
电击完了以后是在室温放10min吗？
Put cells in medium (10ml) immediately after electroporation.
BTW: use 4mm gap cuvettes for electroporation
【在 w*********n 的大作中提到】
: 在把1.3X107细胞和DNA混合以后是在冰上放10min？ 电击完了以后是在室温放10min吗？
:
: 10
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I*****y
发帖数: 6402 | 6 记得我以前就用Lipofectamine转，work的还不错，以前实验室有个特殊的protocol,我
现在都忘了
【在 w*********n 的大作中提到】
: 本人最近刚开始学作JurkatT细胞的转染.网上有说拿电转的,也有说拿Fugene6转的,请
: 问有哪位大虾有经验做过转染JurkatT cell,麻烦贴个protocol.多谢了.
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w*********n
发帖数: 439 | 7 dicty 大虾, 今天我按你的protocol试了，还是没转进去。我怀疑我的细胞有问题或者
我的电击仪没设置好。
请问你平时怎么养Jurkat T的，
另外请帮我看一下电击仪的连接设置，多谢！ |
w*********n
发帖数: 439 | 8
【在 w*********n 的大作中提到】
: dicty 大虾, 今天我按你的protocol试了，还是没转进去。我怀疑我的细胞有问题或者
: 我的电击仪没设置好。
: 请问你平时怎么养Jurkat T的，
: 另外请帮我看一下电击仪的连接设置，多谢！
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w*********n
发帖数: 439 | 9
【在 w*********n 的大作中提到】
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w*********n
发帖数: 439 | 10
【在 w*********n 的大作中提到】
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w*********n
发帖数: 439 | 11
【在 w*********n 的大作中提到】
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T*****u
发帖数: 3257 | 12 我也有同样的问题，电转化学转都试过了，都没work。
【在 w*********n 的大作中提到】
: dicty 大虾, 今天我按你的protocol试了，还是没转进去。我怀疑我的细胞有问题或者
: 我的电击仪没设置好。
: 请问你平时怎么养Jurkat T的，
: 另外请帮我看一下电击仪的连接设置，多谢！
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d***y
发帖数: 299 | 13 就是RPMI+10%FBS养的。不过可能细胞的克隆不一样，会有点差别。我们是一个个试，
试出这个条件的。
我看不懂你的电击仪的连接设置，跟我们的不一样，我们是BTX-ECM600。
实在不行，就用amaxa nucleofection吧，不过如果你们试验室没有那个仪器，得问问
别的试验室有没有可以借。 |
