o**4
发帖数: 35028 | |
y*****1
发帖数: 73 | |
o**4
发帖数: 35028 | 3 很少啊
【在 y*****1 的大作中提到】
: Study literature first
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n***w
发帖数: 2405 | 4 knockout or knockdown the gene and what's the phenotype or functions? |
o**4
发帖数: 35028 | 5 这个都有人做了，关键的问题是我发现这个很重要的蛋白A跟另外一个很重要的蛋白B能
相互作用，
而A跟B的功能很重要，都已经有研究了，但是没人发现他们能相互作用，
接下来该怎么办呢？
【在 n***w 的大作中提到】
: knockout or knockdown the gene and what's the phenotype or functions?
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s******s
发帖数: 13035 | 6 我瞎说两句。比如研究一下到底哪个domain有相互作用。比如A蛋白的S domain
和B蛋白的T domain有相互作用。然后用已知有相互作用的domain比如X和Y替代。
理想化的结果就是A(S)+B(T)正常，A(S)+B(Y)或者A(X)+B(T）不正常，但是双突变
A(X)+B(Y）能够rescue表型。不过这个估计比较看运气
【在 o**4 的大作中提到】
: 这个都有人做了，关键的问题是我发现这个很重要的蛋白A跟另外一个很重要的蛋白B能
: 相互作用，
: 而A跟B的功能很重要，都已经有研究了，但是没人发现他们能相互作用，
: 接下来该怎么办呢？
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o**4
发帖数: 35028 | 7 这个是mapping domain，
怎么证明这个相互作用对于细胞很重要的？
【在 s******s 的大作中提到】
: 我瞎说两句。比如研究一下到底哪个domain有相互作用。比如A蛋白的S domain
: 和B蛋白的T domain有相互作用。然后用已知有相互作用的domain比如X和Y替代。
: 理想化的结果就是A(S)+B(T)正常，A(S)+B(Y)或者A(X)+B(T）不正常，但是双突变
: A(X)+B(Y）能够rescue表型。不过这个估计比较看运气
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c**k
发帖数: 1228 | 8 knockdown, then rescue with wt, normal; rescue with binding deficient mutant
,abnormal?
【在 o**4 的大作中提到】
: 这个是mapping domain，
: 怎么证明这个相互作用对于细胞很重要的？
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w***a
发帖数: 4361 | 9 先make mutation disrupt interaction，然后再dominant negative?
不怕麻烦的话，就make knock in animal啥的，
用mutant置换原始copy。
【在 o**4 的大作中提到】
: 比如对干细胞的多能性？
: 谢谢
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n***w
发帖数: 2405 | 10 disrupt interaction and then observe phenotype of stem cells....
【在 o**4 的大作中提到】
: 这个是mapping domain，
: 怎么证明这个相互作用对于细胞很重要的？
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s******s
发帖数: 13035 | 11 我不是说了么，单突变有问题，双突变换domain能够rescue表型。
【在 o**4 的大作中提到】
: 这个是mapping domain，
: 怎么证明这个相互作用对于细胞很重要的？
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o**4
发帖数: 35028 | 12 哦，好复杂啊
【在 s******s 的大作中提到】
: 我不是说了么，单突变有问题，双突变换domain能够rescue表型。
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y*****1
发帖数: 73 | 13 Do you have enough money and time? |
s*********t
发帖数: 600 | |
s*********t
发帖数: 600 | |
o**4
发帖数: 35028 | 16 但是突变基因，它如果有表型，也有可能是别的原因，不是因为破坏interaction啊？
【在 n***w 的大作中提到】
: disrupt interaction and then observe phenotype of stem cells....
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o**4
发帖数: 35028 | 17 但是相互作用的domain有可能有别的功能啊 （十分有可能）
【在 s******s 的大作中提到】
: 我不是说了么，单突变有问题，双突变换domain能够rescue表型。
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s******s
发帖数: 13035 | 18 能rescue mutant phenotype还不够啊? 什么都有可能，
你所有的实验都不要做了
【在 o**4 的大作中提到】
: 但是相互作用的domain有可能有别的功能啊 （十分有可能）
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i*****g
发帖数: 11893 | 19 这种明的不能明的实验还要问，真是小白，真是90后 |
o**4
发帖数: 35028 | 20 这个基因跟别的蛋白相互作用的domain功能相当多 （本身基因功能就相当多），
所以我觉得不可能rescue mutant phenotype的啊
【在 s******s 的大作中提到】
: 能rescue mutant phenotype还不够啊? 什么都有可能，
: 你所有的实验都不要做了
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o**4
发帖数: 35028 | 21 你牛逼？
【在 i*****g 的大作中提到】
: 这种明的不能明的实验还要问，真是小白，真是90后
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y***i
发帖数: 11639 | 22 做一堆point mutation, resue, yeast 2 hybrid, 再加各种functional assay，能做
的都做上。反正就这么些手段。
【在 o**4 的大作中提到】
: 这个基因跟别的蛋白相互作用的domain功能相当多 （本身基因功能就相当多），
: 所以我觉得不可能rescue mutant phenotype的啊
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o**4
发帖数: 35028 | 23 点突变就能改变两个蛋白的相互作用是么？
【在 y***i 的大作中提到】
: 做一堆point mutation, resue, yeast 2 hybrid, 再加各种functional assay，能做
: 的都做上。反正就这么些手段。
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e****s
发帖数: 1125 | 24 前面牛人们提到的Knockdown, rescue with WT&mutants应该是很好的方案，
功能多为什么就不能Rescue?
真要是来问建议的就别太钻牛角尖了，把前期工作做好，然后判断值不值得深入。感觉
是要花很长时间的，如果是一个重要蛋白的话，会是很好的Story。
但如果你现在对哪个功能有影响还不清楚的话，个人觉得有一定风险。Knockdown或者
别的方法能确定哪个功能收到影响了，就绝对值得深入研究。
【在 o**4 的大作中提到】
: 这个基因跟别的蛋白相互作用的domain功能相当多 （本身基因功能就相当多），
: 所以我觉得不可能rescue mutant phenotype的啊
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y***i
发帖数: 11639 | 25 重要的点突变能。当然truncated protein更容易做，点突变工作量大但说服力更大
一点。
可以从保守氨基酸中找重要氨基酸。蛋白已经有结构，或者相似的蛋白有结构，也可
以尝试从结构上猜测重要氨基酸。
【在 o**4 的大作中提到】
: 点突变就能改变两个蛋白的相互作用是么？
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