m******5
发帖数: 1383 | 1 谁能分享一个用来体外转录ＲＮＡ探针用的Ｔ７ promoter序列？ 赶进度，想ｐ出来
直接用来转录 |
a****o
发帖数: 1786 | 2 买个Ambion的kit, 里面就有Promoter序列 |
m******5
发帖数: 1383 | 3 specifically which kit from Ambion?
I knew the sequence, but I was not sure if we can directly add the sequence
in a 5' to 3' manner upstream of antisense primer, is there any requirement
in the regards of linker or flanking sequence?
【在 a****o 的大作中提到】
: 买个Ambion的kit, 里面就有Promoter序列
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i***l
发帖数: 1656 | 4 搜 NEB HighScribe Kit， 里面序列或者Mention了具体要求或者直接有个Linker
记不清了，Kit 手册绝对有
sequence
requirement
【在 m******5 的大作中提到】
: specifically which kit from Ambion?
: I knew the sequence, but I was not sure if we can directly add the sequence
: in a 5' to 3' manner upstream of antisense primer, is there any requirement
: in the regards of linker or flanking sequence?
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i***l
发帖数: 1656 | 5 Linker肯定是要的
【在 i***l 的大作中提到】
: 搜 NEB HighScribe Kit， 里面序列或者Mention了具体要求或者直接有个Linker
: 记不清了，Kit 手册绝对有
:
: sequence
: requirement
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c*********r
发帖数: 1312 | 6 T7 TAATACGACTCACTATAGGG
T3 AATTAACCCTCACTAAAGGG
这是Ambion里的序列。
我都是直接加在引物5'直接P下来做模板，起始模板量足够的话，产量还不错。
【在 m******5 的大作中提到】
: 谁能分享一个用来体外转录ＲＮＡ探针用的Ｔ７ promoter序列？ 赶进度，想ｐ出来
: 直接用来转录
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m******5
发帖数: 1383 | 7 5'of antisense ?
Thank you much for sharing this!!!!
【在 c*********r 的大作中提到】
: T7 TAATACGACTCACTATAGGG
: T3 AATTAACCCTCACTAAAGGG
: 这是Ambion里的序列。
: 我都是直接加在引物5'直接P下来做模板，起始模板量足够的话，产量还不错。
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c*********r
发帖数: 1312 | 8 如果Forward primer --> reverse primer 的方向和mRNA 5' --> 3'的方向是一致的。
Forward primer: sense probe
Reverse Primer: anti-sense probe
总之，靠近上游的promoter，转录sense Probe；靠近下游的promoter，转录anti-
sense probe。
【在 m******5 的大作中提到】
: 5'of antisense ?
: Thank you much for sharing this!!!!
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m******5
发帖数: 1383 | 9 THank you!
【在 c*********r 的大作中提到】
: 如果Forward primer --> reverse primer 的方向和mRNA 5' --> 3'的方向是一致的。
: Forward primer: sense probe
: Reverse Primer: anti-sense probe
: 总之，靠近上游的promoter，转录sense Probe；靠近下游的promoter，转录anti-
: sense probe。
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a****o
发帖数: 1786 | 10 直接把你要的序列加在之后就行了
MaxiScript就行
Epicentric有类似的产品
好像更便宜
The GGG is very important for high yield
【在 c*********r 的大作中提到】
: T7 TAATACGACTCACTATAGGG
: T3 AATTAACCCTCACTAAAGGG
: 这是Ambion里的序列。
: 我都是直接加在引物5'直接P下来做模板，起始模板量足够的话，产量还不错。
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c*********r
发帖数: 1312 | 11 你确定是Epicentric吗？我没搜到。是不是一个拼写类似的品牌？我在想找一个比
ambion便宜的kit，我其实只需要酶和buffer就行了，Ambion的kit里的其它东西其实可
有可无。。。
多谢！
【在 a****o 的大作中提到】
: 直接把你要的序列加在之后就行了
: MaxiScript就行
: Epicentric有类似的产品
: 好像更便宜
: The GGG is very important for high yield
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