s******y
发帖数: 220 | 1 好不容易，被针扎了以后，结果有了improve：）
我提取了nuclear fraction后，那个suspension很黏糊糊的，应该是DNA很多的原因吧？
anyway，我用针头fitler了好久，然后做WB。
结果能看到我要的带，但是背景很高，看图，
我又把膜多洗了几遍，也没明显效果，请问有什么办法，能消除背景吗？
很明显，旁边的cytosolic 同一个蛋白，就没这个背景问题，谢谢。
BTW, 目标蛋白是150kd左右的那个，图片上是不同的曝光时间的结果。 |
s******s
发帖数: 13035 | 2 load太多了，或者DNA太多，或者盐太高
吧？
【在 s******y 的大作中提到】
: 好不容易，被针扎了以后，结果有了improve：）
: 我提取了nuclear fraction后，那个suspension很黏糊糊的，应该是DNA很多的原因吧？
: anyway，我用针头fitler了好久，然后做WB。
: 结果能看到我要的带，但是背景很高，看图，
: 我又把膜多洗了几遍，也没明显效果，请问有什么办法，能消除背景吗？
: 很明显，旁边的cytosolic 同一个蛋白，就没这个背景问题，谢谢。
: BTW, 目标蛋白是150kd左右的那个，图片上是不同的曝光时间的结果。
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Y**********j
发帖数: 369 | 3 DNA酶消化，降低上样量（10x?)，加大洗涤体积和时间，等等吧，效果会好很多的。实
在不行沉淀重溶一次，也会好一些。
吧？
【在 s******y 的大作中提到】
: 好不容易，被针扎了以后，结果有了improve：）
: 我提取了nuclear fraction后，那个suspension很黏糊糊的，应该是DNA很多的原因吧？
: anyway，我用针头fitler了好久，然后做WB。
: 结果能看到我要的带，但是背景很高，看图，
: 我又把膜多洗了几遍，也没明显效果，请问有什么办法，能消除背景吗？
: 很明显，旁边的cytosolic 同一个蛋白，就没这个背景问题，谢谢。
: BTW, 目标蛋白是150kd左右的那个，图片上是不同的曝光时间的结果。
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