t********n 发帖数: 64 | 1 最近做Co-IP,beads用的是GE的Protein G Sepharose 4 Fast Flow,结果发现用的和
我目的抗体同源的IgG也能拉下目的蛋白来,我怀疑是beads的作用,大家有遇到过这种
情况吗? |
c******r 发帖数: 3778 | 2 non specific binding,很常见。多半是IgG的binding,beads的作用可能性小一点。
多洗洗,或者换一种detergent洗,或者调整一下盐浓度。不行的话还可以换一种igG试
试看。这玩意儿没办法,就是试了。 |
s*********t 发帖数: 600 | |
r********g 发帖数: 109 | 4 可能是没洗干净。如果你probe一下不相关的蛋白(比如一个看家蛋白),你会惊讶地
发现它也和你的目的蛋白“相互作用”。我一般会测一下洗脱液看还有没有蛋白。 |
v*******a 发帖数: 759 | 5 什么方法测洗脱液?够灵敏吗?
【在 r********g 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 可能是没洗干净。如果你probe一下不相关的蛋白(比如一个看家蛋白),你会惊讶地 : 发现它也和你的目的蛋白“相互作用”。我一般会测一下洗脱液看还有没有蛋白。
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n***w 发帖数: 2405 | 6 啥叫pre-clear一下?
【在 s*********t 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : pre-clear一下下。
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s******s 发帖数: 13035 | 7 标准protocol都应该有吧,用beads不加antibody先把背景去掉,然后
再加antibody新beads
【在 n***w 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 啥叫pre-clear一下?
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