h**********r 发帖数: 671 | 1 问个弱智的问题,我想在agar平板上筛选,外源基因受IPTG诱导,请问有没有什么好方
法不用转到液体96孔板上就能诱导基因表达的呢?
多谢! |
o*****r 发帖数: 156 | 2 这个很难吧?什么时候诱导呢? 12h之后喷雾?
关键是就算诱导表达了,也不好检测吧。
不知到你有多少个克隆。
【在 h**********r 的大作中提到】 : 问个弱智的问题,我想在agar平板上筛选,外源基因受IPTG诱导,请问有没有什么好方 : 法不用转到液体96孔板上就能诱导基因表达的呢? : 多谢!
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s*******e 发帖数: 1010 | 3 不能直接加到Agar里面吗?我做蓝白斑就是直接配平板的时候加IPTG的 |
h**********r 发帖数: 671 | 4 IPTG不能直接加到agar里,如果加的话阳性克隆会不长,这是鉴定阳性克隆(例如T7
promoter)的方法之一。
好像液体生长有一种类似于lactose诱导的混合培养基,等glucose用完之后自动诱导,
不记得了,不知道用到agar里可行不。挺麻烦的吧。
另外考虑用非诱的启动子。
我要做个directed evolution,有了一个比较好的筛选assay。看别人动不动就Liquid
Handling/Robotic Lab Automation,所以心里没底。故此一问,想先平板初筛一下。
没有这方面的经验,心里发毛。
谢谢! |
s*******e 发帖数: 1010 | 5 F. William Studier有一篇“Protein Production by Auto-Induction in High-
Density Shaking Cultures”就是做的自动诱导,你可以借鉴一下看看能不能用到Agar
上面
Liquid
【在 h**********r 的大作中提到】 : IPTG不能直接加到agar里,如果加的话阳性克隆会不长,这是鉴定阳性克隆(例如T7 : promoter)的方法之一。 : 好像液体生长有一种类似于lactose诱导的混合培养基,等glucose用完之后自动诱导, : 不记得了,不知道用到agar里可行不。挺麻烦的吧。 : 另外考虑用非诱的启动子。 : 我要做个directed evolution,有了一个比较好的筛选assay。看别人动不动就Liquid : Handling/Robotic Lab Automation,所以心里没底。故此一问,想先平板初筛一下。 : 没有这方面的经验,心里发毛。 : 谢谢!
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h**********r 发帖数: 671 | |