h**********8
发帖数: 650 | 1 关于蛋白相互作用
在microarrey， peptides pull down, gst pull down 中， 都可以重复到肽段和兴
趣蛋白的相互作用
但是在293细胞中共表达了全长蛋白，coip就是没有结果。
求助高人 |
c******g
发帖数: 49 | 2 不是高人.
先确定是不是假阳性，肽段做的相互作用假阳性比较多.
COIP 也可以改进下条件，这个有时候比较tricky |
g*********r
发帖数: 9366 | 3 HTRF
【在 h**********8 的大作中提到】
: 关于蛋白相互作用
: 在microarrey， peptides pull down, gst pull down 中， 都可以重复到肽段和兴
: 趣蛋白的相互作用
: 但是在293细胞中共表达了全长蛋白，coip就是没有结果。
: 求助高人
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b****r
发帖数: 17995 | 4 microarray 怎么做的互作？ 293表达会不会有什么问题
换个细胞系看看 |
f*******e
发帖数: 354 | 5 共转都没有，太假了吧？那内源性还有希望吗？
质粒是否正确？
定位是否一致？
怎么取得蛋白，wcl？核浆分离？
【在 b****r 的大作中提到】
: microarray 怎么做的互作？ 293表达会不会有什么问题
: 换个细胞系看看
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G******O
发帖数: 189 | 6 抗体好使么？是带TAG的蛋白？
【在 h**********8 的大作中提到】
: 关于蛋白相互作用
: 在microarrey， peptides pull down, gst pull down 中， 都可以重复到肽段和兴
: 趣蛋白的相互作用
: 但是在293细胞中共表达了全长蛋白，coip就是没有结果。
: 求助高人
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p****9
发帖数: 240 | 7 我觉得可能是293中蛋白表达的蛋白丰度不够，不知道你对共表达的检测用的什么手段
，如果是western那有可能就是这个问题。
蛋白相互作用其实是一个K值反应，和浓度有很大关系，在活细胞中就是丰度问题。 |
s******y
发帖数: 28562 | 8 你们以前做的实验，如果是用片段作的话，和用全长蛋白做起来
结果是有可能有差别的，
可能性之一就是你们那个全长蛋白需要激活变构后才能暴露出那个结合的肽段来和底物
结合。要证实这个的话，可以做几段truncation, 看看是否有truncate 能够
和你们的底物结合。
另外一个可怕的可能性，就是你们用肽段做出来的是不符合生理环境下的伪结果。
【在 h**********8 的大作中提到】
: 关于蛋白相互作用
: 在microarrey， peptides pull down, gst pull down 中， 都可以重复到肽段和兴
: 趣蛋白的相互作用
: 但是在293细胞中共表达了全长蛋白，coip就是没有结果。
: 求助高人
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