a*******g
发帖数: 33 | 1 小鼠腹腔取得的巨噬细胞，放在tissue culture plate上刺激20h左右后，要用来做流
式。使用3mM EDTA和10mM glucose的buffer在37度放上15分钟后，细胞依然很少脱落。
大家有没什么好办法？谢谢 |
o**d
发帖数: 3080 | 2 一般来说5mM的EDTA就可以搞定。
还有一种土办法：用注射器（10mL DMEM 无血清）附上25G（或更细）的针头，用力将
mf冲下来，这个要求手劲要大。如果还有很多粘附的，就再来一次，注意要换新的DMEM
。
做flow不需要太多细胞吧，不行的话换Trypsin也可以，反正你也不会再继续培养了。
【在 a*******g 的大作中提到】
: 小鼠腹腔取得的巨噬细胞，放在tissue culture plate上刺激20h左右后，要用来做流
: 式。使用3mM EDTA和10mM glucose的buffer在37度放上15分钟后，细胞依然很少脱落。
: 大家有没什么好办法？谢谢
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m*****u
发帖数: 15526 | 3 try ice cold PBS.
【在 a*******g 的大作中提到】
: 小鼠腹腔取得的巨噬细胞，放在tissue culture plate上刺激20h左右后，要用来做流
: 式。使用3mM EDTA和10mM glucose的buffer在37度放上15分钟后，细胞依然很少脱落。
: 大家有没什么好办法？谢谢
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a*******g
发帖数: 33 | 4 试了ice cold PBS，细胞也是岿然不动。trypsin有说会消化掉细胞表面抗原，大家做
macrophage会用trypsin、EDTA一起来消化脱壁吗？ |
p****e
发帖数: 105 | 5 试一试3mM EDTA in Cold PBS，用枪使劲吹。
【在 a*******g 的大作中提到】
: 试了ice cold PBS，细胞也是岿然不动。trypsin有说会消化掉细胞表面抗原，大家做
: macrophage会用trypsin、EDTA一起来消化脱壁吗？
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d***8
发帖数: 2039 | 6 让flask坐冰上两小时，然后用iced PBS吹。
操，我怎么把这秘籍给漏出来了。 |
