s********8
发帖数: 619 | 1 做表达用的,这个serine是个conserved residue. |
i*********0
发帖数: 915 | 2 一般都没事，我做的一个gene就是t变成了s，不过很保守，都是sq／tq domain。 |
h**********8
发帖数: 650 | 3 不好说， 我做的一个蛋白， 某位点也是这样突变。
问题是， 这个位点报道可以磷酸化， 不知道如此突变会影响磷酸化效率么。
【在 i*********0 的大作中提到】
: 一般都没事，我做的一个gene就是t变成了s，不过很保守，都是sq／tq domain。
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w******n
发帖数: 767 | 4 fix it，不然以后说不清楚。
【在 s********8 的大作中提到】
: 做表达用的,这个serine是个conserved residue.
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l**********1
发帖数: 5204 | 5 Agree
otherwise next setp likes
Site-directed mutagenesis etc
who believe?
【在 w******n 的大作中提到】
: fix it，不然以后说不清楚。
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M*****n
发帖数: 16729 | 6 看看是不是SNP.
表以为别的species是S， 你这儿就没有SNP。
S变成T的SNP是常见的。
现在Genome测得多了，所谓的wildtype是相对的，没有绝对的wildtype.
所谓的reference 其实是most common variant，不是绝对的wild type. |
s******s
发帖数: 13035 | 7 重新克隆呗，能费啥事？也说不定ref是错的，经常的事情
【在 s********8 的大作中提到】
: 做表达用的,这个serine是个conserved residue.
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s********8
发帖数: 619 | 8 又测序了一个克隆,目前为止没有突变.看来还是polymerase的问题.
问题是这个基因有2.5kb,还得接着测,但愿没突变了.
【在 s******s 的大作中提到】
: 重新克隆呗，能费啥事？也说不定ref是错的，经常的事情
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h******y
发帖数: 55 | 9 把突变那个和没突变的做个比较就知道要不要紧了啊。
没突变那个是不能省的，要不就说不清。
多设计几个引物，多挑几个克隆，一次全测了，不要挤牙膏啊。 |
s********8
发帖数: 619 | 10 一次全测?我比较小农,我一般一次只测一个克隆, 序列没问题再接着往下测,帮老板省
钱啊...
【在 h******y 的大作中提到】
: 把突变那个和没突变的做个比较就知道要不要紧了啊。
: 没突变那个是不能省的，要不就说不清。
: 多设计几个引物，多挑几个克隆，一次全测了，不要挤牙膏啊。
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l**********1
发帖数: 5204 | 11 fi you Boss need to save money (for avoiding at least five positive clones plus two control clones for
one time outside sequencing)
is equal wasting your time or lowering your work accuracy/integrality's amplitude,
then You should Move on to next PI ASAP. That is better for you
even you are 凤凰N,
but this field was and is and future is also 烧钱的领域 只适合贵族干 不适合凤凰PI his/her Lab.
【在 s********8 的大作中提到】
: 一次全测?我比较小农,我一般一次只测一个克隆, 序列没问题再接着往下测,帮老板省
: 钱啊...
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s******s
发帖数: 13035 | 12 一个测序也就三四刀，你一天工资要100刀了吧？一天浪费的试剂更多了吧？
浪费时间在等测序上，其实不是给老板省钱
【在 s********8 的大作中提到】
: 一次全测?我比较小农,我一般一次只测一个克隆, 序列没问题再接着往下测,帮老板省
: 钱啊...
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s********8
发帖数: 619 | 13 大家对我一次测一个克隆这么有意见啊,呵呵,我等测序的时候还干别的有很多事啊,不
适只做这一个实验呀.不过已经拿到了测序结果了,克隆没问题可以接着往下做了:)
其实同时还做了一个5k的,主要是测这个耽误了两天. |
o********r
发帖数: 775 | 14
同学，现在实验时间往往比钱更重要，如果你做的是热门课题，至少有3个顶级实验室
同时在做这个，你只要晚一点就被scoop。
我们做实验验证的时候，同一个PCR基本用3种酶同时扩增，有一次（第一次测序失败）
同时用了3种酶，两侧各3个引物，27个PCR，54个测序一起做。
【在 s********8 的大作中提到】
: 大家对我一次测一个克隆这么有意见啊,呵呵,我等测序的时候还干别的有很多事啊,不
: 适只做这一个实验呀.不过已经拿到了测序结果了,克隆没问题可以接着往下做了:)
: 其实同时还做了一个5k的,主要是测这个耽误了两天.
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s********8
发帖数: 619 | 15 学习了...看来我是比较低效率:)
【在 o********r 的大作中提到】
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: 同学，现在实验时间往往比钱更重要，如果你做的是热门课题，至少有3个顶级实验室
: 同时在做这个，你只要晚一点就被scoop。
: 我们做实验验证的时候，同一个PCR基本用3种酶同时扩增，有一次（第一次测序失败）
: 同时用了3种酶，两侧各3个引物，27个PCR，54个测序一起做。
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