x******m 发帖数: 736 | 1 最近rna extraction很不顺,260/230ratio很低,bioanalyzer中的RIN很低。
用乙醇洗过以后,有白色的沉淀。用buffer和水溶解以后,还是可以看见白色沉淀,有
点透明。有人说可能是盐,但是用isoproponal 和乙醇洗了几遍,还是有。 |
x******m 发帖数: 736 | |
I***a 发帖数: 13467 | 3 同病相怜啊,
我还是用试剂盒,
我得260/280样品在 2.03-2.05之间,260/230变化就比较大 |
s******s 发帖数: 13035 | 4 我同样sample分两份,用机器自动抽,出来的260/230都可能有很大的区别
【在 I***a 的大作中提到】 : 同病相怜啊, : 我还是用试剂盒, : 我得260/280样品在 2.03-2.05之间,260/230变化就比较大
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I***a 发帖数: 13467 | 5 怎么处理260/230 ratio 底的样品?
【在 s******s 的大作中提到】 : 我同样sample分两份,用机器自动抽,出来的260/230都可能有很大的区别
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u*b 发帖数: 110 | 6 下游要做什么?我感觉提的浓度高时ratio就好,浓度低就很没准,但是好像没有影响
到下游实验。另外一般说是不要等沉淀全干再加水,否则不溶,还可以65度加热几分钟
帮助溶解。如果是盐的话就不知道了 |
k****o 发帖数: 589 | |
x******m 发帖数: 736 | 8 trizol
for RNA-seq. needs high integrity RNA |
p****p 发帖数: 3360 | 9 260/280怎样?有可能是蛋白污染。萃取后吸水相的时候千万千万不能贪婪。
【在 x******m 的大作中提到】 : 最近rna extraction很不顺,260/230ratio很低,bioanalyzer中的RIN很低。 : 用乙醇洗过以后,有白色的沉淀。用buffer和水溶解以后,还是可以看见白色沉淀,有 : 点透明。有人说可能是盐,但是用isoproponal 和乙醇洗了几遍,还是有。
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h****6 发帖数: 229 | 10 What is your sample type? Tissue? blood? Sample size in mg? |
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x******m 发帖数: 736 | 11 rat liver.
around 90 mg.
【在 h****6 的大作中提到】 : What is your sample type? Tissue? blood? Sample size in mg?
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x******m 发帖数: 736 | 12 最近rna extraction很不顺,260/230ratio很低,bioanalyzer中的RIN很低。
用乙醇洗过以后,有白色的沉淀。用buffer和水溶解以后,还是可以看见白色沉淀,有
点透明。有人说可能是盐,但是用isoproponal 和乙醇洗了几遍,还是有。 |
x******m 发帖数: 736 | |
I***a 发帖数: 13467 | 14 同病相怜啊,
我还是用试剂盒,
我得260/280样品在 2.03-2.05之间,260/230变化就比较大 |
s******s 发帖数: 13035 | 15 我同样sample分两份,用机器自动抽,出来的260/230都可能有很大的区别
【在 I***a 的大作中提到】 : 同病相怜啊, : 我还是用试剂盒, : 我得260/280样品在 2.03-2.05之间,260/230变化就比较大
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I***a 发帖数: 13467 | 16 怎么处理260/230 ratio 底的样品?
【在 s******s 的大作中提到】 : 我同样sample分两份,用机器自动抽,出来的260/230都可能有很大的区别
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u*b 发帖数: 110 | 17 下游要做什么?我感觉提的浓度高时ratio就好,浓度低就很没准,但是好像没有影响
到下游实验。另外一般说是不要等沉淀全干再加水,否则不溶,还可以65度加热几分钟
帮助溶解。如果是盐的话就不知道了 |
k****o 发帖数: 589 | |
x******m 发帖数: 736 | 19 trizol
for RNA-seq. needs high integrity RNA |
p****p 发帖数: 3360 | 20 260/280怎样?有可能是蛋白污染。萃取后吸水相的时候千万千万不能贪婪。
【在 x******m 的大作中提到】 : 最近rna extraction很不顺,260/230ratio很低,bioanalyzer中的RIN很低。 : 用乙醇洗过以后,有白色的沉淀。用buffer和水溶解以后,还是可以看见白色沉淀,有 : 点透明。有人说可能是盐,但是用isoproponal 和乙醇洗了几遍,还是有。
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h****6 发帖数: 229 | 21 What is your sample type? Tissue? blood? Sample size in mg? |
x******m 发帖数: 736 | 22 rat liver.
around 90 mg.
【在 h****6 的大作中提到】 : What is your sample type? Tissue? blood? Sample size in mg?
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w******n 发帖数: 767 | 23 哈,我遇到过,提小鼠肝脏RNA,最后有一大坨白色的,溶不了。解决方法请按照TRIZOL
说明书严格操作。
1.裂解要充分,悬液要透明,看不到没溶的组织。
2.氯仿抽提离心时间要足够。
3.4度离心。
最后得到RNA应该是速溶的。
【在 x******m 的大作中提到】 : 最近rna extraction很不顺,260/230ratio很低,bioanalyzer中的RIN很低。 : 用乙醇洗过以后,有白色的沉淀。用buffer和水溶解以后,还是可以看见白色沉淀,有 : 点透明。有人说可能是盐,但是用isoproponal 和乙醇洗了几遍,还是有。
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I***a 发帖数: 13467 | 24 2.氯仿抽提离心时间要足够。
-----一般多长时间啊? |
l**********1 发帖数: 5204 | 25 15 min 4℃
Both
TRIzol@
//tools.invitrogen.com/Content/SFS/ProductNotes/F_071215_Trizol%20and%20Trizol%20LS.pdf
or
ISOGENE@
//www.nippongene.com/pdf/manual_english/ISOGEN_LS_2_091001.pdf
【在 I***a 的大作中提到】 : 2.氯仿抽提离心时间要足够。 : -----一般多长时间啊?
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